실험 Q&A Cell Biology > Transfection
crispr/cas9 넉아웃 실험
kk (비회원)
santacruz 사의 CRISPR/Cas9 제을 사용하여 넉아웃을 진행하였습니다.
정확한 제품명은 Double Nickase plasmid 라고 하네요.
넉아웃을 시켰고, 넉아웃 cell은 colony selection하여 골랐습니다.
western blot으로 넉아웃 단백질이 발현 안되는 것을 몇번의 계대배양을 거치면서 지속적으로 확인하였습니다.
이 cell을 가지고 xenograft를 하였고, 형성된 종양조직을 적출하여 종양 일부를 갈아 western blot을 하였습니다.
그런데, 여기서 전혀 예상치 못하게 타겟단백질이 발현이 되었습니다. 그것도 약물처리군에서 아주 빵빵하게...
santacruz에서는 일단 넉아웃이 확실하게 되었다면 recovery가 되어 다시 발현은 안될 것이라고 답변하였지만, xenograft에 대한 data는 없어 이 부분에 대해서는 답을 못주겠다네요...
혹시 넉아웃 실험을 하셨고, 넉아웃 cell을 가지고 xenograft를 해 보신 분들중에, 왜 이런 결과가 나왔는지 아시는 분 계시면 답을 알려주세요. 왜 그럴까요?
참고로, 사용한 cell은 human cancer cell line이고, 실험동물은 mouse이고, western에 사용한 antibody는 human origin에 대한 antibody입니다.
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