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질문 플라스미드..
자루  |  2008.04.21 16:46
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
대장균을 이용하여 PPARr 플라스미드를 만들고 있습니다.
시퀀스 확인 후, 라지 컬쳐해서 플라스미드를 추출해봤는데...
문제는 이들의 플라스미드의 양이 너무 적다는 것입니다.
3ug/ul밖에 나오지 않습니다.
다른 유전자는 그러지 않았는데...PPARr만 이렇게 사람 속을 썩히네요..
벌써..두번째입니다...ㅡㅡ^

교수님 말씀으로는...
유전자에 따라 대장균내 벡터를 잘 만들지 못하는 유전자도 있다고 하시는데...

음...그래서...라지컬쳐를 하지 않고...
미니컬처만 한 후(약 10개 정도), 균체를 모으고... kit으로 플라스미드를 뽑아내면 어떨까 싶은데...

고수님들의 의견 부탁드립니다.
#플라스미드
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2008.04.22   
어떤 대장균을 사용하고 있는지는 모르겠지만 대장균 타입을 바꾸는것도 방법이고
10개 미니프랩하는것도 방법이고
미디 프랩하는것도 방법입니다.
개구리웨스턴 중급자  |  2008.04.22   
얼마나 고농도로 DNA를 뽑아야 하시길래..그런지 모르겠지만..
제 경험상 3ug/ul는 훌륭한 것 같습니다...

또한 elution시에 님께서 b/f 또는 물을 지금보다 적게 넣어 추출하는 방법도 있구요..

제 생각에는 지금 뽑은 것을 더 농축해야 한다면 에탄올(100%) 또는 isopropanol로 농축하시는 건 어떨지요..
자루  |  2008.04.22    
제가 잘못 적었네요..
3ug/ul가 아니라...3ug/50ul 즉...70ng/ul입니다..죄송합니다...

고수님들의 귀중한 의견들...너무너무 감사합니다..

참고해서...다시 한번 시도해보겠습니다..

너무너무 감사드리니다..
개구리초보생~~  |  2008.04.28   
벡터가 low copy인지 high copy인지부터 알아보는게.....^^
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