실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
RT mixture 어떻게 섞어 주시나요?
RT입문자 (비회원)
RT-PCR 과정 중 RT를 할때에
처음에 total RNA와 oligo dT, DEPC water를 넣고 먼저 가열한 다음에
reaction buffer, DTT, dNTP, inhibitor, RTase를 넣고 다시 가열을 하잖아요..
이때 reaction buffer, DTT, dNTP, inhibitor, RTase를 먼저 tube에 혼합하고 sample에 양 맞춰서 넣어줬는데..
이 mixture가 잘 혼합이 안되는 느낌?이 있습니다..
저는 따로 votaxing은 안해주고 spin down만 해줬는데..
남은 용액이 얼마나 남았는지 확인하려고 피펫으로 땄는데.. 뭔가 그제서야 섞이는 느낌? 이더라고요..
다른 분들은 RT할 때에 votaxing이나 pippeting으로 혼합하시나요?
아니면 저처럼 spin down만 가지고도 혼합이 잘 되나요?
어제 처음으로 RT-PCR 했는데.. band가 아.예. 하나도 안나와서..
오늘 다시해보는데 이러니까.. 이게 문제였던건가 싶고 엄청 찝찝하네요;
하지만 inhibitor가 똑 떨어져서ㅠㅠ 다시 하기도 애매한 상황이라 일단진행은 하는데ㅠㅠ
다른 분들은 어떻게 하시는지 궁금합니다..
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