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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 mammalian cell에서 단백질 정제
정제초보  | 2006.06.15 23:26
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
저는 HEK293 cell에서 발현되는 target protein을 정제하고자 합니다. 우선 제가 선택한 target protein의 정제법으로는 target protein의 antibody를 이용한 affinity column을 제작하여 분리, 정제할려고 합니다. 먼저 이 column을 제작해야하는데 어떤 resin을 써야하는지(protein-G agarose bead를 사용한다고 얼핏들었는데 잘 몰라서^^;;), 어떻게 column을 packing 해야 하는지 전혀 아는바가 없습니다.
먼저 column의 제작 방법과 분리 방법을 알려주시면 감사드리겠습니다. 제가 설명이 부족해서 고수님들께서 잘 이해가 되셨는지 모르겠네요. 단백질정제에 많은 노하우가 있으신 분이나, 저와 같이 target protein과 antibody를 이용한 정제를 해 보신 분이
있으시다면 꼭 ~~~~~^^ 조언 부탁 드립니다. 학위 과정중에 너무나 중요한 실험이기에
자꾸 맘이 조급해지네요. 그럼 많은 분들의 답변 부탁드립니다.
#단백질 정제
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
bio  |  2006.06.16    
his-tag을 쓰셨다면 니켈 컬럼을 쓰시면 되구요..
그렇지 않다면 antibody를 이용한 컬럼을 쓰셔야 겠지요...
protein-G agarose bead는 IP를 해서 하는거 같은데..
앞다리땡글이  |  2006.06.23   
His taq 을 하셨다면
니켈 컬럼 대신에 spin 컬럼형식으로되어 있는 정제 kit를 사용하시는 편이 좋을것입니다.
affinity column이라고해도 elution 할때 vol이 증가하게 되는데
spin 컬럼형식은 플라스미드를 kit로 뽑을때 처럼 spin 컬럼형식이여서
시간도 적게 걸리구 간편합니다.
다들 장단 점은있겠지만은요..
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