실험 Q&A Chemical biology > Analysis
Pmal protein fusion 사용중 cleavage에 관한 질문입니다.
MBP연구 (비회원)
안녕하세요 원래는 clevage를 할 생각이 없었는데 꼭 필요하게 되어 뒤늦게 하게되었습니다. Pmal system을 사용하고 있구요 MBP fusion protein 은 현재 -20도에서 보관중입니다. 메뉴얼대로 하더라도 모든것이 처음이다 보니 궁금한것이 있어서요 같은 system을 사용해 보신 분이라면 cleavage 내용 프로토콜을 좀 알려주실순 없는지요 .. 정말 참고만 해볼수 있어도 감사할 것 같습니다. 물론 제 단백질에 맞는 조건을 찾는 노력정도는 당연히 해야겠지만요 cleavage mixture를 만드는것까지는 할 수있겠는데 크로마토그라피가 문제입니다. 메뉴얼에는 DEAE-Sapharose ion exchange chromatography 와 다른방법으로 hydroxyapatite chromatography 가 있는데요 셋팅이 현재 아무것도 되어있지 않은 제가 최소비용으로 cleavage를 하고싶다면 어떠한 방법이 좋을까요... 그리고 Factor Xa 가 꽤 비싼것 같은데요 이 제품을 이용하시는 분들은 보통 어떤 용량사서 쓰시나요? 50ug 짜리로는 제가 계산해봐도 pretest 이것저것 하고나면 정말 남는거 없을것 같은 생각이 드네요 전 순수 분리된 단백질을 항원으로 coating하여 여러차례 ELISA를 할 예정입니다. 도아주시면 감사드리겠습니다.
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