실험 Q&A Chemical biology > Analysis
이제 막 실험 입문한 사람입니다.ㅜㅜ IS의 최종농도 구하기(글이 좀 길어요.ㅠㅠ 화학고수님들, 도움 부탁드립니다.ㅠㅠ)
ㅜㅠ (비회원)
논문 저자한테 여러번 메일을 보내봤으나
자꾸 "Delivery Failure"의 메일만 되돌아와서ㅜㅜ 여기에 도움을 요청해 봅니다.
제가 amine류에 대해서 연구를 하는데요.
논문 내용을 간략하게 적어볼게요. 그리고 저의 생각도 나름대로 적었어요.
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<논문 내용>
1. amine std solution
1000ug/ml의 IS를 1M HCl : MeOH(v/v)로 10ug/ml로 희석해서 준비한다.
2. 추출과정
2g의 시료와 200uL IS를 준비한다.
0.4M HClO4 10mL에 넣는다.
이 과정을 2번 거치고 최종적으로 25mL로 맞춘다.
3. 유도체화 과정
2mL aliquot를 test tube에 옮긴다.
400uL 2M NaOH, 600uL 0.95M NaHCO3로 pH를 9로 맞춘다.
유도체화 용액은 10mg에 1mL acetonitrile로 준비한다.
4mL의 유도체화 용액을 2g aliquot에 넣고 100uL ammonia solution을 넣는다.
4. SPE 과정
6mL acetonitrile로 activation한다.
6mL water로 equilibration한다.
sample loading한다.
4.5mL water로 washing한다.
4.5mL acetonitrile로 elution한다.
5. 샘플 희석
elution한 것을 질소가스에 완전히 건조시킨다.
건조된 잔여물에 5mL의 acetonitrile로 용해시킨다.
6. HPLC 과정
10uL aliquot를 넣어서 HPLC 분석을 한다.
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<저의 생각>
1번 과정은 MV=M'V'로 구하면 될 것 같은데요.
2번 과정은 2.5ug/25mL인 것 같은데요.
2.5ug는 200uL*(10ug/1000uL)로 부터 구했어요.
문제는 3번에서 막힙니다.
그것도 아니면....
처음에는 200uL IS : 10mL HClO4 였고
나중에는 전부 다 질소가스로 건조시키니까
100uL IS : 5mL acetonitrile인가요?
그것도 아니라면...
aliquot라는게 whole solution과 subdivided solution이 같은 환경이라고 하니까 농도는 결국 2.5ug/25mL의 농도를 가진건가요?
그리고 5mL로 질소농축한 것에서 10uL aliquot한 것도 농도 계산해야하나요?
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