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질문 MTT assay 할때요 ~!!
MTT  |  2008.04.04 13:30
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
나중에 스펙으로 확인할때

셀을 어느정도 키우고 배지에 바로 MTT solution 을 넣어주나요?

아니면 배지를 제거하고 새로운 배지를 넣어주고 몇시간 후에 MTT solution

을 처리하고 확인을 하나요?
#MTT
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2008.04.04   
MTT assay protocol을 몇개 찾아 보시면 해답을 찾을 수 있을것 같습니다.

참고로 MTT assay ptotocol중 하나를 올려 드립니다.

MTT Assay of Cell Numbers after Drug Treatment Protocol

Arthur Kerschen 4/6/05

1) Plate 500-10,000 cells in 200ul media per well in a 96 well plate.

Leave 8 wells empty for blank controls.

2) Incubate (37C, 5% CO2) overnight to allow the cells to attach to the wells.

3) Add 2ul of drug of interest dissolved in DMSO to each well.

Place on a shaking table, 150rpm for 5 minutes, to thoroughly mix the samples

into the media.

4) Incubate (37C, 5% CO2) for 1-5 days to allow the drug to take effect.

5) Make 2ml or more of MTT solution per 96 well plate at 5mg/ml in PBS.

Do not make a stock as MTT in solution is not stable long-term.

6) Add 20ul MTT solution to each well. Place on a shaking table, 150rpm for

5 minutes, to thoroughly mix the MTT into the media.

7) Incubate (37C, 5% CO2) for 1-5 hours to allow the MTT to be metabolized.

8) Dump off the media. (dry plate on paper towels to remove residue if

necessary.

9) Resuspend formazan (MTT metabolic product) in 200ul DMSO.

Place on a shaking table, 150rpm for 5 minutes, to thoroughly mix the formazan

into the solvent.

10) Read optical density at 560nm and subtract background at 670nm.

Optical density should be directly correlated with cell quantity.

그럼 수고하세요..

SPEED
대왕개구리안재진  |  2008.04.05   
셀이 안정화 되는 시간이 중요하다고 생각합니다.
저는 셀에 따라 다르지만 12 ~24hr을 인큐베이션합니다. 그리고 실험하는 당일 70% 정도의 덴스티를 맞춰줍니다.
월리  |  2008.04.07    
cell death or survival 을 보기 위한건가요?
우선 셀이 어느정도 있을때(80%) 저 같은 경우는 MTT solution을 두시간 동안 인큐베이션 해주고 나서
solubilization buffer 넣어줘서 랩으로 감싸고 다시 인큐베이션 오버나잇 해줍니다.
그리고 다음날 상등액을 취해서 측정하죠.
프로토콜 마다 다르긴 하지만 셀 배양액을 없애고 MTT solution만 넣는 경우도 있고요,,
전 그냥 배양액 있는상태에서 MTT solution을 넣어주어도 별 상관 없었습니다.
그 대신 두시간 후에 현미경으로 보시면 살아있는 세포들이 MTT를 흡수해서 보랏빛으로 보일겁니다.
그럼~
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