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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 qPCR 데이터에서 melt curve two peaks이 나타납니다
알초초초리  | 2016.08.11 13:35
세포에서 분리한 cDNA로 실험하고 있습니다
두 종류의 human세포에서 같은 프라이머로 같이 한번에 돌리고 있습니다 
A 세포에서는 one peak로 깔끔하게 잘나오지만
B세포에서는 two peaks로 두가지 Tm값이 나옵니다
같은 프라이머라서 프라이머 문제라는 생각이 들진 않고 
B세포의 RNA가 이상한건지... 어떻게 해결해야할까요?
원래 세포종류가 다르면 같은 유전자라도 Tm값이 다른건가요? 복수의 peak이 나오는것은 어떻게 해야할까요? 고수님들 답변 부탁드립니다 
#qPCR
 
#melt curve
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리엑스트라  |  2016.08.11   
같은 human이면 모든 조직에서 같은 genome으로 존재하기 하니까요..

말씀하신 내용으로는 B세포 실험할 때 gDNA contamination됐다고 밖엔...
(primer 디자인할때 일부러 exon 1과 exon2 에 걸쳐서 짜니까요...)

알초초초리  |  2016.08.11   
cDNA 합성하는 제품 키트에 gDNA remover가 들어있습니다...
개구리Daegu*  |  2016.08.11   
splice variants 는 고려 해 보셨나요??
 primer의 target sequence사이에 혹여나 variants가 존재하는지 유무를 확인해 보시기 바랍니다.
개구리Daegu*  |  2016.08.11   
splice variants 는 고려 해 보셨나요??
 primer의 target sequence사이에 혹여나 variants가 존재하는지 유무를 확인해 보시기 바랍니다.
개구리바보에게바보가  |  2016.08.12   
qPCR product를 한번 agarose gel에 내려보세요.
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