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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
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질문 agarose electrophoresis할때 loading dye와 DNA 추출 관련 질문입니다
알쭈얀  | 2016.07.13 21:00
1. DNA loading dye가 bromophenol blue, xylene cyanol FF, sucrose로 이루어져 있다고 하는데 앞의 두개 다 쓰지 않고 sucrose 만 써도 되는지요? 학교 실험실에 이 세개 모두 있는지 확실하지가 않아서 아니면 아예 loading dye 안쓰고 바로 전기영동시기면 결과가 잘 안나올까요? Etbr염색약은 있어서 UV illuminator로 DNA를 염색해서 볼수는 있습니다.

2. 구강 상피세포 DNA를 추출하려고 하는데 cell lysis protocol을 사용하려고 합니다. 이때 DNA cell cysis를 넣고 바로 proteinase K를 넣어야 한다고 되어있는데 proteinase K가 실험실에 없고 시간상 구하기도 힘듭니다. 엄청 순수한 DNA를 추출할 필요는 없고 전기영동으로 띠 존재 확인할수만 있으면 되는데 proteinase K 건너뛰고 바로 DNA 추출 protocol 진행해도 될까요?

3. 브로콜리 세포 DNA를 추출할때는 CTAB protocol을 사용하려고 합니다 .이때 isopropanol 대신 EtOH 처리해도 문제가 없을까요? 이 역시도 같은 이유로 시약을 구하기가 힘든 상태입니다ㅠㅠ전기영동으로 띠만 확인하면 됩니다


정말 감사합니다
 
#DNA purification
 
#electrophoresis
 
#loading dye
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리그러니까  |  2016.07.13   
네.. 뒤 방법으로 다 가능할듯합니다. 
1번에 sucrose는 꼭 넣어주세요. glycerol로 대체하셔도 되고요. 
qwe  |  2016.07.13    
1. BPB랑 xy~~~은 전기영동이 얼마나 됐는지 알려주는 지표입니다. 따라서 없어도 되긴 하는데
전기영동 너무하면 DNA 다 빠져버릴테니깐 시간 잘 계산해서 하시면 되겠네요


2. 없어도 DNA가 나오기는 하죠


3. Isopropanol 대신 EtOH 써도 되는데 EtOH를 Isopropanol 대신으로 쓰려면 volume이 더 많아야 비슷한 역할을 합니다. 
이렇게 하기 위해선 상층액을 tube 2개에 나눠 담고 거기다가 EtOH를 Isopropanol 넣는것보다 더 많이 넣으시면 될듯 합니다. 
물론 DNA 존재'만' 확인하기 위해서라면 그냥 해도 되고요

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