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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 cDNA합성 후 튜브 바닥의 침전물..
한재익  | 2008.03.15 19:10
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
혈액내 cytokine 분석을 위해 혈액에서 RNA를 Trizol로 추출한 후,,
cDNA를 intronbio 키트로 합성했습니다.
그랬더니 튜브 바닥에 하얀색의 침전물이 생기네요,, PCR도 반응이 없고요..

이전에 다른 혈액으로 동일한 방법으로 했을때는 PT-PCR이 잘 되었었는데,,,

이 침전물이 무슨 의미인지 도통 모르겠네요,,
예전에 plasmid DNA를 PCR했을때도 튜브 바닥에 동일한 것이 생겼었는데,,
그땐 PCR은 반응이 잘 일어났었어요,,
DNA합성량이 너무 많아서 그런가보다 하고 넘어갔었는데(어쨌든 실험은 잘 되었었거든요 ㅡㅡ;;),,
그때 간과하고 결국 지금 혼나고 있네요 ;;;

혹 cDNA 합성 후 일정시간, 온도로 incubation을 해주어야 DNA합성된게 용해되는건데 제가 그걸 안하고 있는건지요?? 아니면 DNA농도가 너무 높아서 다 녹지 못하는거고,, 반응이 없는건 DNA농도가 너무 높기 때문인건지요?? ㅡㅡ;;

고수님들 조언 부탁드립니다.

#cDNA 침전 RT-PCR
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2008.03.16   
침전물의 정체는 사실 알기가 어렵습니다.
동일한 키트에서 이전에 문제가 없었다면, 아마도 sample의 문제일 가능성이 가장 큽니다.
다시 실험을 진행해 보는 수밖에는 도리가 없는 듯합니다.

그리고 RT를 할때, 보통 RNA는 0.1-1ug수준을 가지고 합니다. 너무 많은 RNA는 오히려 cDNA합성을 저해할 수 있으므로 무조건적으로 많은 양을 가지고 실험을 하는 것은 좋지 않습니다.
한재익  |  2008.03.16    
답변 감사합니다.
근데 문제는,,
샘플이 1회 검사분량밖엔 안된다는 것이네요 ㅜ.ㅠ
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