실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
Outer membrane protein isolation 질문
레벨1 사람이나온다
안녕하세요. 학문 발전에 힘써주시는 선후배 여러분.
제가 이번에 Outer membrane proteins(OMPs) 를 분리하여 2DE를 진행하려고 합니다.
다만 제가 단백질은 전무후무하여 protein extraction에 관한 내용을 찾아보는데 어려움이 많았습니다.
제가 OMPs extraction을 하려고 하는 protocol은 다음과 같습니다.
1. 배양 균을 6000 x g 에서 10 min 원심분리 후 lysis buffer에 resuspension
(lysis buffer condition: 50 mM Tris/HCl, 100 mM NaCl, 5% glycerol, protease inhobitor cocktail(Sigma), pH 7.5)
2. Resuspension을 probe sonicator로 10/30 sec의 interval로 10분간 처리.
3. Sonicated suspension을 10,000 x g 에서 20 min centrifuge (cell debris 제거 위함)
4. 분리된 상층액을 다시 ultracentrifuge. 20,000 x g 에서 60 min. (pellet: OMPs)
위와 같이 진행해도 OMPs isolation에 큰 문제가 없는지 잘 모르겠습니다.
단백질 쪽으로는 기초원리가 부족해서 기초적인 질문인지도 모르고 이렇게 질문 드립니다.
위의 과정이 적절한지, 과정 중에서 수정되야 할 부분이 있는지도 잘 모르겠습니다.
많은 경험을 가지고 계신분께 조언을 듣고 싶습니다.
작은 조언 하나도 감사히 생각하겠습니다.
감사합니다.
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