[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
대한암학회
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 신광 교수
전체보기 실험 Q&A 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 2806  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 대장암 cell line에서의 GAPDH발현이 안되요..
알newway  | 2016.05.18 19:55
human colorectal cancer cell line인

HCT 116, LoVo, SW 620, DLD-1

여기 4개에서 RNA 추출후 (수득률을 좋습니다)

applied biosystem사의 역전사 키트로 cDNA를 얻어서 

리얼타임 PCR을 진행하는데

reference gene으로 GAPDH를 사용했습니다.

실험을 수차례 진행하는데 GAPDH발현이 전혀 안되더라구요.

참고로 GAPDH는 bioneer에서 구입하였습니다 human용으로요.

amplicon size 는 149이고, Tm이 F-56.2, R-52.5 이고 

실험을 할때 10pM로 맞추고 한 well당 20ul 용량으로 맞춰서 0.8ul를 넣었습니다.

다른 primer에서는 발현이 조금씩은 되는데, GAPDH에서만 발현이 안됩니다. 

심지어 NTC에서도 다른것들은 발현이 있는데 (SYBR 으로 실험중입니다)

GAPDH는 그냥 바닥에 일직선이네요.. cycle은 40회 입니다..

다음주가 발표인데,, GAPDH가 발현되지 않으니.... 자료분석이 불가능하고...

어디서부터 뭐가 잘못되었는지 모르겠습니다..


고수님들 조언 부탁드립니다
#GAPDH
 
#cell line
 
#real-time PCR
 답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대학원생  |  2016.05.18    
석사 1학기 학생입니다.

혹시 다른 cell line에서는 GAPDH가 발현이 되는지요
안된다면 Primer의 문제일 것 같네요


저희 실험실의 경우는 GAPDH와 18SrRNA 두개의 Refrence를 걸어 실험하는데
18SrRNA나 beta-actin 같은 다른 house keeping gene으로 test 해보는건 어떨까요
알newway  |  2016.05.18   
LoVo를 이용해서 gene expression 연구한 논문에서 GAPDH를 사용한걸로 확인 했고,


나머지 3개의 cell line에서 GAPDH를 사용했다는 논문자료는 제가 가지고 있지 않네요.
beta-actin을 사용한건 있는데... 


beta-actin도 같이 해봐야 할거 같습니다


GAPDH가 당연히 발현될거라 생각한게 오산이었나봅니다....
답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
프레스티지바이오로직스 프레스티지바이오로직스
항체의약품 전문 CDMO, EU-GMP, GDP 시설 내 셀라인·공정개발·임상배치·PPQ·스케일업·원료분석·..
인성크로마텍 인성크로마텍
[고해상도 다중 면역형광 이미징 시스템] ORION™ 한번의 면역염색 및 한번의 스캔으로 바이오마커 20개..
인성크로마텍 인성크로마텍
[BQC] 산화 스트레스(Oxidative Stress) 분석 / 세포 분석 / 조직 염색 키트 20% 할인 (4.28까지)
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN No.1 한국공식대리점] TECAN 봄맞이 대행사! 견적 및 Demo 신청시 상품권 지급 (4.9까지)
서린바이오사이언스 서린바이오사이언스
[Cell Signaling Technology] Conjugated Antibody 20% 할인 이벤트!! (4.30까지)
대일랩서비스 대일랩서비스
Thermo 기초장비 30~20% 할인 이벤트(재고한정) (5.31까지)
최근등록   더보기 >
westernblot antibody 순서   03.27
Goldenrod Animal Lancet 국내 구입처가 있는지 궁금합니다.   03.27
호기성 균주로 API CHB kit 실험 시 미네랄 오일 첨가하면 안되나요?   03.27
과산화수소 없는 TMB   03.27
계면활성제 합성   03.27
pcDNA3.1-PCDH10을 가지고 계신 분 있으신가요.. ㅠㅠ   03.27
Wa-like, DS-1 like strain 의미   03.27
HPLC 관련 질문 드립니다.   03.27
적혈구 vs 구강상피세포   03.27
ta cloning의 이론과 관련해서 질문드립니다   03.27
최근답변자 우수답변자
알매드사이언스

대왕개구리SPEED

알Ekdrkddkwl

대왕개구리강시

알연람

개구리실험조아

알옹채

알권춘배
대왕개구리안재진

꽃개구리착한사람

개구리처음처럼

개구리Daegu*

꽃개구리Jake

꽃개구리TX

꽃개구리bio

개구리별숲
실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
홈  |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의		 트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
엘앤씨바이오 광고