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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 tumor 조직에서 RT- PCR
올챙이실험나부랭이  | 2016.05.10 16:19
안녕하세요 
제가 다른 일반 tissue나 cell에서는 RT-PCR은 많이 진행해봤는 데 tumor에서는 처음이라 질문드립니다.
저희는 sampling을 할 때 tumor를 4등분을 해서 EP tube에 보관을 하는 데요
그 중 RNA extraction을 위해서 4개의 tube 중 하나를 골라 조금 떼어 사용하거나 4개의 샘플을 전부 조금 사용합니다
제가 PCR data 나온 것을 confirm 하던 중 같은 tumor 조직인 데 패턴이 정 반대로 나와 원래 cDNA sythesis해놓은 것을 다시 pcr을 돌려 확인을 해보니 처음 data와 일치하는 경우가 생기게 되었습니다.
이 data를 얻어낼때 어느 1-4번 어떤 튜브에서 잘라 사용했는 지는 모르겠습니다.
이런 경우도 간혹 있나요? tumor라서 이런 패턴 보일 수도 있다고 교수님께서 그러셨는 데 확실한지는 잘 모르신다고 하셔서.. ^^;
알려주시면 감사하겠습니다
좋은 오후 보내세요~


C57BL6 Mouse, MC38 cell injection
#Tumor
 
#RT-PCR
 
#band
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리Favorite  |  2016.05.10   
원래 whole tumor 를 homogenize 하고 거기사 일부를 따서 실험을해야하는데 먼자 일부 분리해두고 실험했으니 결과가 이상할수밖에요. 보관의용이성, 상황등 이햐는갑니다만 제가 말한것처럼해야하는것이 옳습니다. 여의치않으면 자르기전에 사진을 찍어두고 어디부위를 샘플링한결과 라는것을 명기해야하는데 아쉽네요. 저직실험은 샘플링이 굉장히 중요하답니다. 그러지않으면 나중에 본인의 결과를 신뢰하기힘들고 가설이 맞는지 틀렸는지 구분하기힘듭니다. 지치기도쉽고요. 롱런하시려면 차분하고 충분히 생각하셔서 계획을 잘짜고 실험 하시기 바랍니다. 참 연구자가 되시길..
올챙이실험나부랭이  |  2016.05.12   
답변감사합니다!

저희가 RT-PCR 뿐만 아니라 IF,WB도 진행해야하기때문에 sample을 조각내어 진행하고 있습니다.

이런 경우는 어떻게 해야 결과에 변동이 없는지 궁금합니다.


역시 조직을 사진 찍어놓고 부위별로 표시를 해 두는 방향으로 진행해야할까요?
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