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melting cruve analysis 는 몇번 해보지 않아 큰 도움이 되지 않겠지만.....
1 set의 primer가지고도 충분히 커브가 그려집니다.
ABI장비를 사용하셨는데...... 저의 짧은 소견으로는 증폭이 전혀 일어나지 않은것 같습니다.
혹, mastermix가 syber Green과 같은 형광다이가 들어간 premix 가 맞겠지요???
(설마 아닐리가 없겠지요...ㅎㅎㅎㅎ)
Real-Time PCR끝난 후 produc로 전기영동해서 확인을 해보시는게 어떨까요???
band가 확인이 되면 PCR과정중에 문제가 있을 수 있을거라 예상 해볼수 있을 것이고
band가 확인이 되지 않는다면 primer 및 조성에 문제가 있을거라 예상은 해볼 수 있을 것 같은데.
target이 bta actin이면 왠만하면 signal이 그려질텐데....
나오지 않는다는건 전체적으로 primer를 비롯한 조성 및 PCR condition을 재 확인이 필요할 것 같습니다. (cDNA농도 및 상태, primer의 농도및 상태, Real-Time PCR premixdml 상태, 증폭 조건 등등)
그래프 상에서는 형광도가 측정이 되지 않았습니다.
real-time PCR 수행후 product를 agarose gel에 걸어 보세요...
밴드가 나오지 않는지 부터 확인하셔야 할것 같습니다.
지금상으로는 증폭이 안된건지, 형광 dye에 문제인지 알수가 없을듯 합니다.
그래프 보는 방법 중에
log 값이 아니라 linear 방식으로 본 것이 저런건가요?
그렇다면 증폭이 전혀 되지 않은 것 같네요
positive control과 함께 실험하여 확인해보심이 어떨지