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레벨4
Vinejung
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16.02.25 14:13
키트로 정제하지 않고도 ligation 가능합니다. 벡터를 500ng넣고 Restriction enz 이랑 thermosensitive CIP (alkaline phosphatase, TSAP) 같이 넣고 반응시킨뒤 80C에서 10분해주고 바로 인서트넣고 ligation 해도 됩니다. TSAP 가 없으면 Gel elution 없이 바로 kit로 cleanup만 하시면 손실이 덜할겁니다. 제한효소에 의해 짤려나온 DNA는 phosphate가 없기때문에 ligation 시 걱정안하여도 됩니다
안녕하세요
한국 자이모리서치 담담자입니다.
Fragment dna purification kit를 사용하셨다고했는데 Column의 DNA Size limit에 걸렸을 가능성이 있을거같네요
자세한 상담은 010-8832-6303으로 주시기 바랍니다. 감사합니다.