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GST-fusion 벡터에 클로닝을 해야합니다.
pGEX-4T-1 같은 벡터를 구하세요, frame 별로 pGEX-4T-1,2,3 세개가 있는데 frame에 맞춰서 유전자를 클로닝하면 됩니다.
E. coli DH10, DH5a, BL21(DE3) 같은 균주에 넣어서 IPTG로 induction하고 GSH-affinity colume으로 정제해서 사용합니다.
만일 GST-pull down 하려는 단백질이 human protein이라면 아니면 mammalia cell에서 발현시키는 GST-fusion 벡터를 구해서 클로닝하고 human cell에 transfection시키면 됩니다.
Cell을 키워서 lysis 시키고
GSH-affinity colume을 통과시키면 GST-protein-target protein이 elution됩니다.