실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
affinity column에서 좋지않은 냄새가...
안일 (비회원)
affinity column(CNBR-activated sepharose)을 사용해 단백질 정제를 하고있습니다. column에서 예전에도 조금 나긴 했었는데, 이번엔 좀 심해서 spin down으로 여러번 워싱해서 사용했습니다. 좀 못미더웠지만. (냄새의 원인은 bacterial growth라고 추정) 그결과, yield가 1/2정도밖에 나오질 않았습니다. capacity가 줄어든 거라면, F/T에서 나와야 하는데, F/T에서도 나오질않고 ㅠㅠ 좀 미심쩍은 점이 바인딩시킨후 elution전에 washing을 충분히 했는데도 불구하고, 단백질 확인하니, 평소완 다르게 발색이 옅게 나온점입니다. 그럼 정제하려는 단백질도 washing과정중에 씻겨나간건지, 제소설이지만, column속 단백질과의 바인딩이 느슨하게 되서, washing중 씻겨나간게 아닌가라는 생각도 듭니다. affinity column에 대한 책이 있으면 추천부탁드려요 *__* 이거,제대로 모르니, 문제생길 때마다 막혀요ㅠㅠ 조금이라도 좋으니, 조언부탁드립니다. 그럼 수고하세요!!! #. 원래는 column을 4도씨에 보관했었는데, 상온에 몇일있었구요. IPTG induction 체크여부도 다시 하고있어요(적은yield)
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