실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
desalting column 관련해서 질문드립니다.(Exclusion limits 관하여.)
레벨5 순똘
protein 정제를 했는데, RNA가 같이 정제된 것으로 추정되고, 아직 자세하게는 모르겠으나 시간이 한달 정도 지나니 RNA가 degradation이 되어서 protein만 남는 것으로 추정되는 결과를 얻었습니다.
그래서 분해된 RNA를 제거하는 실험을 하고자 desalting column을 알아보았습니다.
Bio-rad의 제품을 알아보았는데 (Micro Bio-spin chromatography columns)
Exclusion limits이란게 있더라구요.
5 base pairs (nucleic acids) or 6,000 daltons (proteins,peptides) 라고 적혀있는데
nucleotide 5 base pair면 1.6kDa 정도 일텐데 단백질 6kDa과는 4배나 차이가 나네요.
nucleotide와 protein은 다르기 때문에 그럴 수도 있다고 생각이 들면서도,
desalting column의 원리가 size exclusion chromatography라는 것을 생각하면,
단순히 크기에 의해서만 결정되는게 맞는 것 같다는 생각도 들어서 이상하다는 생각도 드네요.
(물론, 질량(dalton)보다는 분자가 차지하는 공간의 부피나 모양이 더 중요하기에 그럴 수도 있을 것도 같은데, 그렇게 설명하기에는 4배의 차이를 설명하기엔 역부족이지 않나 생각이 듭니다.)
혹시 이부분에 대해 아시는 분 있으면 친절한 답변 부탁드립니다.
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