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레벨5
분자생물학이란
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16.01.20 15:51
substrate의 phosphorylation을 보려고 하시는 건가요?
active kinase를 동물세포에서 purify하여 사용하는것은 상관 없을 테지만,
substrate도 동물세포에서 뽑아서 사용하기엔.. 이미 phosphorylation이 되어 있을 텐데요.
그래서 저는 substrate는 E.coli에서 purify해서 사용합니다..
bead같은 경우에도 잘되는 녀석은 상관없이 kinase assay가 잘 되었고..
이런저런 경우의 수를 제외하고 싶으신 경우에는 bead에서 elution해서 사용하는것이 좋겠죠.
네 . 답변 감사합니다.
일단 둘 다 flag tag를 붙이고 elution 해서 써 봐야겠네요.
말씀대로 세포의 kinase로 인해 이미 phosphorylation 된 상태일 수 있어서 정제 후 phosphatase 처리하는 방안을 생각 중입니다.