실험 Q&A Plant Biology > Transformation
효소식품 아밀라아제, 프로테아제 활성반응
레벨1 박영대
(3) α-아밀라아제 : 양성이어야 한다.
(4) 프로테아제 : 양성이어야 한다. 라고
규정되어 그동안 한국식품분석연구원에 매월 1회 분석을 의뢰하여
양성이라고 판정받아서 제품을 만들었는데 작년 12월까지 지원해주던
검사를 올해부터는 안해주겠답니다.
그래서 구글검색을 통해서 자체검사가 가능한지 검색해봤지만
너무 어렵습니다.
도움을 바라고 싶은 것은.
아밀라아제와 프로테아제의 양성반응이 나오는지 아닌지를 시험해주는
곳을 찾고있습니다. 한 군데 겨우 찾았는데 위 2가지 빼고는 다 할수있다네요.
꼭 도움을 부탁드리겠습니다.
그리고 식품공전에 따른 시험방법에 따라서
① 시약
㉮ 1 % 가용성전분용액 : 가용성전분(최순품) 1 g을 물에 녹이고 호화하여 100 mL로 한다.
㉯맥바인(Mcllvaine) 완충액(pH 6.0 또는 7.0) : 0.1 N 인산일수소나트륨액 일정량에 0.1 N 구연산액을 넣어 pH 6.0 및 7.0으로 각각 만든다.
㉰ 0.1% 염화칼슘용액 : 염화칼슘(순품) 1 g을 물에 녹여 1 L로 한다.
㉱ 요오드시액 : 요오드 0.2 g과 요오드칼륨 2 g을 물에 녹여 100 mL로 하고 그 1 mL에 1 N 염산 1 mL를 넣고 물로 100 mL로 한다.
② 장치
분광광도계(Spectrophotometer)
③ 시험용액의 조제
검체 5.0 g을 정밀히 달아 물 또는 완충액에 녹여 100 mL로 한 다음 여과하여 검액으로 한다. 20 mL 시험관 2개를 준비하여 각각 시험용, 공시험용으로 한다. 시험용 시험관에 1% 가용성전분용액 5 mL, 맥바인완충액(pH 6.0 또는 7.0으로서) 13 mL와 0.1% 염화칼슘용액 1 mL를 넣고 37℃로 가온하고 검액 1 mL를 넣은 후 37℃에서 30분간 방치한다. 별도로 100℃에서 30분간 가열하여 활성을 잃은 검액 1 mL를 위와 같이 조작하여 공시험용으로 한다. 시험용과 공시험용반응액 0.2 mL에 요오드시액 10 mL를 넣은 것을 시험용액으로 한다.
④ 시험조작
물을 대조액으로 하여 액층 1 cm 파장 660 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 시험용액의 흡광도는 공시험의 흡광도보다 0.030이상 작아야 한다. 발색의 정도가 지나쳐 측정이 곤란한 경우는 검액을 희석하여 시험하고 희석배수를 적용한다.
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분광광도계없이 이전 시약반응단계에서 양성반응을 알수있다면 시약을 어찌어찌 만들어서
해보고싶습니다. 프로테아제도 마찬가지로요.
검색을 통해서 두가지의 반응시약, 검사키트, 지시약 등으로 검색해서 업체와도 통화를 해봤는데
전혀 도움이 되지않더군요.
중국에 물건을 팔 예정인데 2가지 양성반응이 나오는 것을 보여달라고합니다.
제가 이런 연구를 전문으로하시는 곳을 찾게될지 정말 몰랐습니다.
검사해주는 기관업체 알려주시면 Goooood입니다.
시약만으로 활성반응 여부를 알수있다면 Gooooooooood입니다.
꼭 선처 부탁드립니다.
이메일로 조언주시면 기쁘고 감사하겠습니다.
sytis@naver.com
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