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프로테인 농도가 적으면 농축하거나 셀수를 높여서 높은 농도로 웨스턴을 하세요.
IP는 단백질의 증감을 보기에 정확하지 않습니다. bead 의 양과 antibody의 양을 잘 조절해야합니다.
예를들어 단백질이 10에서 5로 줄었는데 bead나 안티바디를 5단백질을 잡는 양을 넣으면 변화가 없어보입니다.
얼마만큼의 단백질이 뽑아졌는지는 INPUT 샘플과 비교하면 됩니다.
bead 넣고 IP하기 전에 소량의 input 샘플을 취해서 나중에 IP된 샘플과 비교하면됩니다.
뭐 할수는 있겠지만 다른 쉬운 방법을 놔두고 이 방법을 선택해야 할 이유는 잘 모르겠네요.
정말로 웨스턴으로 안보여서 보이게 할려는 목적으로 IP를 하라고 교수님께서 말씀하셨나요?
윗분 말씀대로, 단백질 농축시키거나, 셀양을 늘리거나, protein extraction buffer를 강한걸로 쓰시거나 (핵단백질)해서 하세요.
교수님께서 왜 그렇게 말씀하셨는지 이해가 안됩니다.
IP 자체가 훨씬 힘듦니다. IP 조건 잡고, IP되는 안티바디 찾는게 훨씬 더 시간이 많이 걸립니다.
차라리 샘플양을 늘려서 단백질을 더 많이 뽑으실 수 있으면, 웨스턴이 IP보다는 백배 쉽고 빠릅니다.