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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
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질문 kit로 DNA purification후에 gel purification할때 질문입니다 ㅠ
올챙이Debora  | 2016.01.12 19:27
MiniBEST로 DNA purification거의 끝난 상태인데요

곧 gel purification을 해야하는데

DNA 100ul를 지금 37도에서 incubation중입니다(프로토콜대로)

겔 영동한후에 well을 잘라서 어디에 담아서 gel purification을 진행해야하는지

또 buffer volume을 gel volume에 3배, 1배 이런 말들이 있는데 이걸로 gel의 volume은 어떻게 알수있는지 프로토콜에 나와있지 않네요ㅠ 

가르쳐주세요 ㅜㅜ


#gel purification
 
#DNA purification
 
#gel volume
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2016.01.12   
젤이 크지 않다면 1.7ml tube에 담으면 됩니다.
만약 젤 무게가 0.3g 이 넘는다면 짤라서 0.3g 씩 담으시면 됩니다.
보통 젤 볼륨에 3배의 버퍼를 넣으니... 0.3g의 젤에서 추출이라면 1ml 정도의 시약을 넣으시면 됩니다. 이때는 측정된 무게의 젤 양으로 결정하시면 됩니다.
지나가다....  |  2016.01.13    
첨부파일 파일첨부: 2.png (58 KB)
이미지 첨부파일
혹시....
"TaKaRa MiniBEST Agarose Gel
DNA Extraction Kit Ver.4.0 " 이 제품을 사용하시는지요?? 전 그 제품을 써본적은 없지만.. 프로토콜 보니까 위에 보는것 처럼 volume 계산법 나와 있네요?? ^^ Gel 잘라서 0.3g이면 GM buffer 900ul 넣으셔서 Gel 녹이시면 되구요..그럼....어디에 담느냐..자른젤이 0.3g보다 더 많이 나간다. ..그럼 E-tube에 좀 넘치겠죠..?? 그러면 FACS tube나 15ml conical tube나 음...E..coli culture용 14ml double cap tube이런거로 하시면 되죠..어디에 하시냐는 뭐 크게 중요하지 않죠..Gel이 잘 녹게 하는게 중요합니다.
고생이 많으시네요...Gel extraction 성공하세요~~^^
 |  2016.01.14    
이해가 되지 않아 서요....

'곧 gel purification을 해야하는데 DNA 100ul를 지금 37도에서 incubation중입니다(프로토콜대로) 겔 영동한후에 well을 잘라서 어디에 담아서 gel purification을 진행해야하는지....'에서 

왜 DNA 100uL을 왜 37도에서 incubation을 하시는가요???

뒷다리짜라빠빠  |  2016.01.15   

위에서 잘 설명해주셨듯이 ep-tube로 영점잡고 자른 gel을 담아서 무게를 재신다음
그 무게 기준으로 볼륨 잡으시면 되구요,
(ex: gel 무게가 0.1g일때 3배=300ul)
여기서 주의해야할 점은 최대한 band부분만 잘리도록 하셔야되요.(그렇다고 밴드부분이 조금이라도 누락되면 그만큼 루즈가 생기고, 너무 쓸데없는 gel이 많이 들어가도 순도가 떨어져요)
"DNA 100ul를 지금 37도에서 incubation중입니다(프로토콜대로)"
-->이부분은 저도 잘 이해가 안되네요ㅠㅠ 정제 진행 단계중의 인큐베이션을 설명하신건지...

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