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 전체 > Immunology > ELISA
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질문 sandwich ELISA 관련 질문입니다...
알ELISA  |  2015.11.12 00:29
안녕하세요. 현재 대학원에서 연구하고 있는 석사생입니다.

현재 sandwich ELISA를 진행하고 있는데 의문점이 몇 가지 있어서 질문드립니다.

일단 첫 번째로

A 라는 protein이 있으면 이를 mono Ab로 coating을 하고 poly Ab로 detection을 하면 희석한대로 잘 나오는데 coating과 detection Ab를 바꿔서 실험을 하면 blank가 가장 높게 나오고 농도가 높아질수록 OD값은 낮아집니다. ELISA buffer는 BD에서 사서 사용하구요. blocking에 문제가 있을까 싶어서 buffer를 1% BSA로 바꿔서 해도 마찬가지네요.

그리고 두 번째로

plasma 를 ELISA로 했을 때, blank보다 값이 낮아지는 경우가 있나요? 같은 sample로 1년 정도 전에 했을 때는 OD가 0.7정도 나왔다면 다시 했을 때는 0.2정도 수준으로 blank보다 낮은 수치가 나오는 경우도 있습니다. sample 양을 늘려도 OD값은 비슷하게 나옵니다.

metdhod는

Ab coating(4도 overnight) -> wash 3회 -> blocking 2h
-> sample(plasma) 2ul/100ul blocking buffer -> wash 5회
-> detection Ab(1Ab+2Ab 30min 먼저 반응 후) 1h -> wash 7회 -> substrate 30min -> stop

입니다. 부탁드립니다.
#ELISA
 
#plasma
 
#sandwich
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