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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 7804  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western blot : transfer 질문입니다~
western  | 2015.10.29 12:06
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
첨부파일 파일첨부: KakaoTalk_20151029_120106387.jpg (97 KB)
이미지 첨부파일
안녕하세요?? western blot에 어려움을 겪고 있는 석사생입니다~
SDS gel을 runnning 하고 NC membrane에 transfer를 하는데요~
transfer하고 난 뒤 폰슈 염색을 하면 (사진처럼) 자꾸만 깨끗하게 transfer되지가 않아서요ㅠㅠ
transfer는 100V에서 1시간 정도 실시하구요~
게시판을 읽어보니까 transfer는 A단위로 조절해야한다고 하던데..
적정 A도 추천 부탁드립니다~
감사합니다^^
#western blot
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개구리Marine  |  2015.10.29   
사진을 봐서는 transfer는 잘 되었는데 중간중간 빵꾸? 나 있는부분이 있는게
membrane과 gel이 서로 잘 안달라붙고, 사이에 기포가 많이 생겨 있었던 것 같습니다.

Gel과 membrane사이에 기포가 절대절대 생기지 않도록 밀대?등으로 살살 밀어서 완전밀착 시키신 다음 하시면 좋은결과 나오실듯 합니다.


western  |  2015.10.29    
답변감사드립니다~
사실 저도 그게 가장 의심되서 membrane 위에 gel 올리고, 3M paper 올린 뒤에 
유리막대로 이용해서 살살 밀어준 뒤 transfer를 하거든요~
그래도 저렇게 지저분하게 transfer되더라구요;;
혹시 제가 놓치고 있는 노하우가 있을까요??
혹시 gel과 membrane을 장착한 뒤에 transfer buffer를 채우는 과정에도 버블이 생길 수 있는건가요??
아 그리고 특이한건, 제가 항상 transfer 할때 두개의 gel을 함께 하는데요, 
꼭 한개는 괜찮고, 한개만 저렇게 지저분하더라구요~

개구리한아름보리  |  2015.10.30   
장착하는 카세트가 않좋은경우도 있어요....기포 안들어가게 잘 장착해야할듯싶네요... 마르지않게 잘 담구어서 하구요
올챙이PinkAlice  |  2015.11.03   
한쪽만 이상이 생긴다면 카세트 만들때 쓰는 스펀지가 오래되거나 카세트자체가 오래되서 타이트하게 gel과 membrane을 잡아주지 못해서 그런것 같기도 하네요.
western  |  2016.03.21    



저도 저렇게 나왔던 적이 있었는데,
카세트가 낡아서 멤브레인과 겔을 꽉 잡아주지 못해서
그런 것 같더라구요~


카세트 새걸로 교체하고 조립할 때도 스펀지에 버블 좀 눌러서 빼준 후에
조립해서 transfer했더니 저런 현상이 사라졌어요!

어떤 한가지 이유라기 보다는 작은 결함?들이 모여서 저렇게 되는 것 같아용



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