제가 처음 시도(다른 분은 해보신 적이 없다고 하네요.)하는 실험인데 트러블슈팅을 하는데 여러 시도를 해도 같은 현상이 있어서, 제가 기본적인걸 놓치는 느낌인데 어김없이 꼬집어 주시면 감사하겠습니다.
plate는 TLC silica gel glass 60에 형광 된 걸로, 사용전에 고온(100도)오븐에 5분 후 사용 했으며,
sample은 SH(5x10^7cells)에서 bligh and dyer method를 이용해서 extraction(freezing dry 방식)dilution ratio : chl/MeOH = 2/로 100ul 하고, -80도에 보관합니다.
apparatus는 비커에 하는데 뚜껑을 덮고, 그안에 filter paper를 앞뒤로 두어서 모두 적신 후, plate에 10-50ul 사이로 sample을 spotting한 후, 자국이 마르는 즉시 전개액에 집어 넣었습니다.
전개 끝나면 상온에 그냥 드라이 한 후, 마땅한 장비가 없어서 DNA work할 때 쓰는 tans-UV로 촬영합니다.
위 방법으로 시행하는데 언제나 결과물은 하나의 밴드만 뜨고 있습니다. 처음에는 전개액 문제로 생각해서 전개액을 바꾸어 봤는데도 똑같고, sample농도문제를 생각해서 NCTL(네거티브), 10, 20, 30, 50 ul 순으로 해봐도 원밴드에서 밝기만 달라지고 다른 곳은 빛나지 않습니다. (sample contamination도 고려했는데 그것도 아닌 것 같습니다.) plate activation이 문제인가 싶어서 30분 으로도 해봐도 결과는 같습니다.
흑시 집히시는게 있으시면 여이치 마시고 말해주세요 ㅜㅜ (흑시 freezing dry 때문에 다른 lipid들이 날아갔을 가능성이 있는 것 같아서 흑시 다른 evaporation방법이나 volume을 줄일 수 있는 방법이 있으시면 코멘트 남겨 주세요.)