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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 제발 도와주세요 ㅠ GPCR western
알연구원  |  2015.10.04 23:48

지금 저는 
G-protein coupled protein 패밀리 중에 하나를 
flag 태깅된 벡터에 클로닝하여 
hela cell 에 transfection 시켜서 웨스턴으로 확인하였는데요 
전혀 전혀전혀전혀 밴드가 나오질 않아요 
시퀀싱상에 문제는 하나도 없는걸 확인했구요 ㅠㅠㅠ

lysis문제 인가 싶어 
RIPA buffer로도 해봤고 
2X lysis buffer로도 해봤는데요 
전혀 안나오네요 

교수님께서는 재촉하시는데 
뭐가 문제인지 전혀 모르겠어요 ㅠ
(transfection문제는 아닌게요 
다른 gene이 들어간 것은 웨스턴 아주 잘 나와요 
그 다른 gene은 co-chaperone입니다)


도와주세요 ㅠㅠ




#GPCR
 
#western
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올챙이Giovanni  |  2015.10.06   
lipofectamine transfection인지 eletroporation인지 잘 모르겠지만
생각해 볼수 있는 변수는 lipo로 transfection하셨다면, vector의 크기가 상당히 커서
잘 안들어갔기 때문에 안됬을 경우.
그리고 정말 단순하게 western할때 쓰시는 antibody가 문제가 있을경우.

두가지 정도가 있을것 같네요...
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