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질문 Dh5a에서 단백질 발현시키고 싶습니다.(도움 부탁드려요^^)
완전초보  | 2015.10.02 09:14
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요.
최근 분자생물학 실험에 입문하여 실험을 진행하고 있는데요.
Dh5a는 클로닝용으로 주로 이용하는 것은 맞지만
Dh5a에서 단백질을 발현 시켜야 할 필요가 있어서요.
벡터지도를 보니 lac_promoter를 가지고 있는데
Dh5a에서 lac_promoter로 단백질 발현이 가능한가요?(T7 promoter는 Dh5a에서 안되는 것은 알고 있는데)
만약에 발현이 된다면 lac_promoter의 경우 IPTG로 발현 유도를 시켜야 되나요?
많은 조언 부탁드립니다.^^
#Dh5a
 
#lac promoter
 
#expression
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2015.10.02   
DH5a에서는 당연히 lac promoter 로 발현이 됩니다.
pUC19나 pBluescript 클로닝할때 X-Gal/IPTG 스크리닝의 원리가 바로 그거거든요.


lac 프로모터/ IPTG 조합으로 발현이 됩니다.
개구리명품남자  |  2015.10.02   
purification용으로 사용하실건가요?

가능합니다만 yield차이 및 생성된 단백질의 stability에 차이가 있을 수 있습니다.

고로 보통은 purification용으로는 BL21 strain을 사용하지요..

무튼 IPTG에 의해 lac operone이 돌기에 강한발현등을 유도하기위해서 IPTG를 첨가해주면 됩니다.
개구리얼음보송이  |  2015.10.05   

vector에 따라 다릅니다. vector system에 따라 inhibitor가 포함된 경우도 있습니다.
기본적으로 단백질 발현용 vector는 inhibitor 있을 겁니다, inhibitor는 단백질 발현을 억제하여 enhancer 가 발현을 유도하기 전에 단백질발현 레벨을 base line으로 떨어트려 실험자가 단백질전기영동으로 발현유무를 확인할떄 도움을 줍니다.
따라서 vector회사의 가이드라인에 따라 균주와 vector를 사용하여 실험을 진행하시는게 가장 정확합니다.

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