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 전체 > Molecular Biology-DNA > Southern Blot Analysis
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질문 hybridization에서 filter에 핵산이 bound 되는 분자적 원리 생각해 보신 분 있나요?
알생명과학짱짱맨  | 2015.09.29 15:14

blotting 과정에서요,
추정상으로
na(핵산)는  filter에 hydrophobic interaction으로 attach되고
만약 charged filter라면 ionic strength로 강화되는데

여기까진 어쨋든 weak한 수준인 것 같고...
covalent bond까지 형성되는 UV linking을 보면

추정상으로
na의 thymine과 filter의 amine 그룹이 covalent 하게 bond 한다고 하는 것 같은데...

그러면 이 부분을 분자적 관점에서 보면

na의 backbone 부분만이 free할 뿐 base side는 전부 filter로 oriented 되어 있기 때문에
subsequent hybridization이 더이상 불가능 하지 않나요?

제가 실제로는 hybridization을 해보지 않았기 때문에
free thymine도 sufficient 하기 때문에 na가 상당히 free하게 있다라고 가정을 해보면
uv linking이나 baking(baking도 covalent bond 형성이 맞다면) 시간을 훨씬 올리면
free했던 na도 전부 bound 되므로 hybrid detection이 거의 불가능해 질 것 같은데
해 보신분 있을까요??

#혼성화
 
#southern
 
#hybridization
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리바보에게바보가  |  2015.09.29   

생각하시는 부분이 맞습니다. UV dose를 일정 수준 이상으로 올리면 hybridization signal이 줄어들지요.

알생명과학짱짱맨  |  2015.09.29   
바보에게바보가 / 감사합니다 ㅎㅎ~~
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