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지니가다가...
(비회원)
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15.08.24 14:39
저희는 실험을 어떻게 하냐면....
실험을 3개의 well에서 나온 sample을 전부 합쳐 잘 섞어준 후 실험 합니다.
이 실험을 3번 반복하는데요..
이렇게 하는 이유는 transfection efficiency가 well간 달라질 수 있기 때문에 그러는거구요
이런식으로 해서 sample 조건당 비교를 하시는거구요.. well간 비교가 아니잖아요..^^
당연히 달라질 수 있으니.. 한번 실험하실 때 well 마다 얻은 건 전부 합쳐서 실험하시고..
이런 실험을 3번 반복하셔서 패턴의 유사성을 보시면 됩니다.
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레벨5
G.P.Ts
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15.08.26 13:07
real time PCR은 감도가 좋은 것으로 알고 있습니다.
그 만큼 파이펫팅 변수가 작용할 수 있습니다.
혹은 siRNA 효과가 적기 때문일 수도 있습니다.
말씀하신대로 웨스턴 블랏이 좀 더 확실할 것으로 생각합니다.
물론 이 실험 역시 실험 차이가 있지만, 발현 자체가 대조군보다 반 이상 떨어지지 않을 경우 해당 siRNA를 쓰지 않는 게 좋은 것으로 알고 있습니다.
siRNA 농도 및 시간별로 처리한 후 상기 실험을 다시 해 보시길 권합니다~
도움이 되길 바랍니다~
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지나가며..
(비회원)
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15.09.03 08:33
일단sample을 prep한 시점은 siRNA을 처리하고 얼마나 지났는지요?
siRNA는 최대 72시간이라고하는데.. 대략 48시간내에 하셔야 합니다.
그리고, 제각각 일수도 있습니다. cell이 siRNA를 잘 안먹는 경우 비일비재해요.
그리고 웨스턴으로 한다고 별로 달라지는건 없습니다.