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yuntobi
(비회원)
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15.07.29 17:05
Agarose gel 방법보다 nanodrop 법이 훨씬 더 정확도가 높습니다.
농도 말고 혹시 순도에 문제가 있는 건 아닐까 조심스럽게 추측해 봅니다.
지금 쓰는 lenti vector가 몇 세대인지도 알아야 하고요. insert gene의 사이즈가 얼마인지도 알아야 합니다. 아무리 농도와 순도가 높아도 insert gene의 사이즈가 너무 크면 효율이 떨어지는 경우가 많고요(학술적으로 최대 얼마까지 된다! 라는 말을 믿고 정말 최대치까지 접근해서 하면 효율은 개판으로 나옵니다). plasmid를 어떤 세포에(293 FT? or 293 T) transfection 하시는지, transfection 할 때 어떤 방법을 쓰시는지(리포좀? , 칼슘, 전기충격 등). 을 알려주시면 더 정확하게 문제를 찾아낼 수 있을 겁니다.
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lenti
(비회원)
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15.07.30 14:16
-yuntobi
nano drop값이랑 전기영동햇을때 차이가 있는것은 순도의 문제인건가요??
순도를 높이기 위해서 midi-prep으로 진행한것인데 순도를 높이는 다른 방법이 있을까요??
지금 사용하고 있는 packaging대 plasmid는 2세대 3세대 모두 사용중입니다.
insert gene의 size가 효율에 영향을 미친다고하시니.. 참고하여 알아보도록하겠습니다.
transfection은 HEK293FT cell을 이용하여 진행중이고, lipofectamine2000을 이용하여 진행하고 있습니다.