HCT116 cell로 RNA isolation하는 과정에서 Trizol 1ml처리 후, chloroform을 넣어야하는데 제가 실수로 5:1:phenol:chloroform(phenol:chloroform:isoamyl alcohol 125:24:1)을 200㎕을 넣었습니다. 이 과정에 이어서 계속 isolation 할 수 있는 방법이 있을까요?
제가 가지고 있는 RNA Isolation 프로토콜은 아래와 같습니다.
1.chloroform 200㎕ 분주 후 vortexing, 상온에서 5min incubation. 2.centrifuge(13,000rpm,15min, 4℃) 3.투명한 RNA층을 transper(약 400-500㎕)한 후, RNA양과 동일한 볼륨으로 isopropanol 분주하고 inverting, 상온에서 5min(or Ice에서 10min incubation.) 4. centrifuge(13,000rpm,15min, 4℃) 5. 상층액 제거하고, 75% EtOH(in DEPC treated-water) 1ml 분주 후, vortexing해서 Centrifuge(13,000rpm,10min, 4℃) 6.EtOH 제거 후, 다시 centrifuge 1min, 여분의 EtOH 제거하고 e-tube뚜껑을 열어서 pellet이 완전히 투명해질 때까지 incuvation. 7. RNA free water 20㎕ 분주 후 pipetting, heat block 55℃,10min 8.10㎕는 save용으로 deep freezer에 보관 9. 나머지 10㎕에 RNA free water 10㎕ 분주 후 centrifuge 13,000rpm, 1min, 4℃ 10. nano drop정량