실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
Cloning 후 protein의 발현을 확인 하고 있습니다.
Protein (비회원)
안녕하세요
Cloning 후 protein의 발현 및 작용에 관하여 연구를 하고 있는 학생입니다.
제가 cloning 하고 있는 protein은 약 600 bp 짜리와 90 bp 짜리 두가지 입니다.
동일한 vector 에 각각 cloning 하여 발현을 확인해 보았습니다.
Frame 이나 sequence는 몇번씩 확인해본 결과 모두 정확하게 cloning 되어 있었습니다.
하지만 600 bp 짜리 protein은 발현이 잘 확인이 되었지만, 90 bp 짜리는 도무지 확인이 되지 않습니다.
ELISA나 IF staining 등을 통해 확인해 보았지만, 어떠한 방법으로도 발현이 확인 되지 않습니다.
90 bp 밖에 되지 않는 것이 발현에 영향을 미치는지 알고 싶습니다.
그리고 이것을 발현시키기 위해서는 또는 확인 하기 위해서 어떻게 해야 할지 알고 싶습니다.
같은 vector 내에서 size가 큰것은 발현이 잘되는 것에 반해, 90 bp 밖에 되지 않는 것은 발현조차안되고 있습니다.
위 vector를 transfection 한 후 mRNA를 통해 mRNA expression을 확인 해본 결과 mRNA expression은 아주 잘되고 있었습니다. protein만 확인이 안됩니다. ㅠ_ㅠ
발현에 사용된 promotor는 CMV이고, poly(A)는 bGH_poly(A) tail을 사용하는 vector 입니다.
도움 부탁드리겠습니다
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