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질문 protein농도구하기, overlapping pcr의 각 volume구하기ㅜㅜ
Rhwjd  |  2015.06.14 20:34
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
농도를 모르는 bsa 5ml이 있는데 280nm에서 50배희석한 OD를 측정했더니 0.45일때,
몰농도(M)와 총 bsa의 양(mg)을 구하는 문제입니다.
------------------------------------------
문제조건으로는 bsa amino acid 개수=583
66463Da, isoelectric point= 4.7 , extinction coefficient=42824M-1*cm-1
optical absorbance=0.667
인데,
제가 풀었을때는 A=ecl해서 c(M)=0.00001 이 나와서 50배 희석했으니 0.00001*50=0.0005M
이고 g/mol*mol/L는 g/L이므로 66463*0.0005=33.2g/L 즉 5ml에는 0.166mg이 있다고
풀었는데 답은 507.2uM 168.7mg이라 합니다.... 어떻게 푸는거죠??ㅠㅠ

또다른 문제는 overlapping pcr을 위한 fragment dna 1,2,3이 각각 농도 40, 33, 20ng/ul이고
size는 각각 300, 400, 133bp입니다. pcr reaction volume이 50ul 일때 각 fragment의
molar ratio가 1:1:1이 되도록 넣을시 total 50ng이 도ㅣ도록 들어가는 각 fragment의 vol을 구하는 것입니다...........모르겟어요ㅠㅠ
Xug/ul*1515/bp수=YuM 이라는 식을 이용하는건 알겟는데......그 뒤로 진행이 안돼요ㅜㅜ
이건 답을 모릅니다...

해결해주실 능력자분을 찾습니당 ㅜㅜ
#overlapping pcr
 
#protein 농도
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2015.06.15   
단백질농도 c (molar concentration= A (absorbance)/e (extinction coeffient)입니다.

OD값이 0.45이고 50배 희석한 것이므로 원액의 260nm OD값은 0.45 x 50이며 이를 BSA의 extinction coefficient인 43824로 나누어 주면 바로 몰농도가 됩니다. (42824는 오타입니다).
계산해 보니 정답으로 적으신 것과 수치상으로 약간 차이가 있는데?

두번째 문제는 단순비례식입니다.
300, 400, 133bp의 크기를 가지는 DNA가 몰비에서 1:1:1비율이 될려면 각각 300ng:400ng:133ng이 되면 됩니다. 총합이 50ng이 되야 하므로 각각은 18ng : 24ng : 8ng이 되면 됩니다. 그러면 각 DNA농도의 volume을 어렵지 않게 구할 수 있을 겁니다.
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