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 전체 > Immunology > ELISA
조회 3010  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 ELISA 실험질문입니다
ELISA 초보  |  2015.06.11 18:22
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요

ELISA실험을 하고있는 석사생입니다

기초가 없이 실험프로토콜만보고 실험을 해왔었는데 다시 이론공부를 하면서 헷갈리는 부분이 너무 많이 질문올립니다 주로 사용하는 방법을 in-direct  입니다

2. 제가 ELISA로 보고자 하는 것은 두가지세포의 단백질을 추출하여 유전자별 발현양상이 어떻게 달라지는지 보고자하는 것입나다
1.  Standard curve  가 꼭 필요하다 하는데 만약 가지고 있는 단백질을 bradford로 정량후에 농도를 맞춰서 96well에 단백질을 코팅하면 스탠다드 없이 OD값 만으로 데이터로 쓸 수 있는지요


2. 제가 ELISA로 보고자 하는 것은 두가지세포의 단백질을 추출하여 유전자별 발현양상이 어떻게 달라지는지 보고자하는 것입니다
그리고 antigen coating-blocking-primary anti-second anti(HRP)-substrate-read
이런과정으로 진행하는데 스탠다드커브가 있어야하는 것이라면 primary anti종류 마다 스탠다드를 코팅하고 안티바디를 붙여야하는 것인가요?? 이점이 가장 헷갈립니다


답변주시면 감사하겠습니다

















#ELISA
 
#in-direct
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
캬라멜콘  |  2015.06.12    
두가지 질문에 모두 다 답변 드리자면, 
보시려는 ELISA Ab에 맞는 std를 코팅해야 합니다 

가지고 있는 단백질로 std curve를 잡으면, 그 단백질에 얼만큼의 target 단백질이 있을지 모르고 
그 양도 정량할 수가 없기때문에 안되구요 

보통 ELISA set를 사시게 되면 그 안에 std가 같이 들어있습니다 (저희는 BD제품을 씁니다)
std는 보통 4번정도밖에 쓸 양이 안되기 때문에 (1000pg/ml에서 serial dilution)
처음 조건 잡을때만 std를 걸고, std curve를 그린 후 나중 하는 실험에서는 
그 std curve에 맞춰 농도를 정량하는 방법을 씁니다 (원래는 할때마다 거는게 맞습니다)
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