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Buffer 를 기준선까지 넣으셨나요?? 기계적으로 error가뜨는거면 조성문제보다는 전기영동자체에 문제가아닐까요
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지나가다
(비회원)
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15.06.03 15:44
젤에 siRNA를 거는건가요?
siRNA는 1:19 acrylamide solution을 사용하고 15%정도는 돼어야 될텐데요..
miRNA or siRNA 실험을 다룬 논문을 참고 하시는게 좋을 듯 합니다.
버퍼는 웰까지 푹 잠겨야하구요.
아,,그리고 젤도 running buffer와 같이 0.5X 또는 1X로 맞추신건 맞는지요?
Buffer는 기준선보다 많이 넉넉하게 넣었구요.
Well도 다 잠기는 상태입니다. Error 떠서 열어봐도 Buffer는 잘 있구요.. well도 물론 계속
잠겨 있는 상태입니다..
Gel 만든 buffer는 1X 맞구요..
예전에는 내리는데 별 문제 없었습니다..
siRNA 자체를 보는게 아니라. Complex를 형성함에 따라 siRNA가 끌려 내려오지 않고
well상에 잘 걸려있는 siRNA : polymer 비율을 찾는 실험이라
사실 gel %가 그렇게 크게 영향을 주는것 같진 않아요..
gel %가 부적합하다고는 요새 저도 느끼고 있긴한데..
우선은 Error뜨는 이유가 제일 답답하네요 ㅜㅜ
혹시 ice에 담가서 해보세요.. 가끔 온도가 너무 올라가도 에러가 뜨더라구요..
온도가 너무 올라가는 이유는 buffer 문제고요. buffer의 농도가 조금만 올라가도
열이 확확 받더라구요..