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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 Gel extraction kit으로 extraction 할 때 plasmid가 잘릴 수도 있나요?
whywhy  | 2015.06.03 09:35
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요 
Qiaz*n 사의 Gel extraction kit를 이용하여 cloning 할 insert를 agarose gel에서 extraction하였습니다.
ligation 전에 vector와 insert의 농도를 비교하고자 다시 agarose gel 에 전기영동을 걸어서 확인해 보니, 오른쪽 그림과 같이 원래 insert 1500bp 아래 850bp? 가량의 새로운 band 가 생기는 현상이 발생하네요. 
extraction 은 제공된 protocol 대로 진행하였고, 지금까지는 이런 경우가 없었는데 2-3번 반복 해 본결과 계속 같은 현상이 나타납니다ㅠㅠ

extraction kit 이용시 plasmid가 잘리기도 하는지, 혹시 해결방법을 아신다면 조언 부탁드립니다. upload image



#gel extraction
 
#cloning
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리닥님  |  2015.06.03   
제 경험상 gel extraction kit를 사용하였을때 plasmid가 잘린적이 한번도 없었습니다.
gel ex.는 protocol 대로만 진행하면 어렵지 않은 실험입니다.
제 생각으론 lab에서 같이 쓰는경우 EB에 문제가 있는 경우를 몇번 보았는데요.
저같은 경우라면 gel ex. 를 먼저 테스트 해봐야 할거같습니다.

cloning 하실 plasmid를 gel ex. 하는데 마지막에 EB를 넣는 과정에서 기존에 사용하신 gel ex.에서 제공하는 EB와 다른 kit에서 제공하는 EB를 이용하여 테스트를 한번 해보시기 바랍니다.
혹시 인근 다른렙에 gel ex.를 가지고 있는 곳이 있으면 그쪽에서 빌려서 사용해보시는게 좋을듯합니다.
whywhy  |  2015.06.03    
닥님 답변 감사합니다.

elution은 DW로 진행했었는데 Tris elution buffer로 한번 시도해봐야겠습니다. 감사합니다. 
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