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질문 3T3 l1 cell counting에 대해
김선웅  |  2015.05.22 13:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요 현재 대학교 2학년에 재학중인 학생입니다.

cell culture를 한지는 이제 2달이 되어가고 MTT와 3T3 l1 분화유도 실험을 해보고있습니다.
처음 cell counting 할때 이부분에서 이해도 잘안됬고 하기가 버거워 실험진행에 버벅거렸다가
최근에야 조금 이해해서 cell counting을 해서 MTT나 분화유도 시 cell seeding을 할 수 있게 되었다고 생각하고 있었습니다.

그런데 cell counting을 할때 의문점이 생겨서 이렇게 질문을 드립니다.
처음 cell counting을 할 때 990ul DMEM과 1ml DMEM에 담겨져 있는 cell에서 10ul를 가져와
100배 희석하여 cell counting을 했었는데요.

이번에 10배로 희석을하여 cell counting을 하면 그 수가 과연 같을까하는 의문이 생겨서 해보았습니다. 그런데 cell counting의 수가 너무 많이 차이가 났습니다.
제가 cell counting을 잘 못하고 있는 부분이 분명하겠지만, 여기서 저의 문제점이 무엇인지 잘 모르겠습니다. 결국 제가 여태껏 해왔던 MTT나 분화유도가 재대로 cell seeding이 안되었다는 것인데.. 제가 해오고있던 모든 것들의 결과는 믿을 수 없게 되어버렸습니다.

한 예로 100배 희석하여 cell counting을 하면 총 3번 cell counting을 했을때 cell의 갯수가 29,28,24가 나와서 이들의 평균의 값에 x10^4 x 10^2 = 1ml 이었고

10배 희석했을때는 68.71.66 으로 이들의 평균 값 x 10^4 x 10 = 1ml이었습니다.
계산해보면 cell counting의 차이나 너무 나서 .. 어떻게 해야할지 모르겠습니다.
  - 단순한 예입니다.

실험실에 계시는 제 위로 선배가 없어서 다른 실험실의 선배나 석사과정을 받고 계시는 대학원생 분에게 여쭈어도 보았었는데 속 시원한 답변을 들을 수 없어서 이곳에 글을 남겨봅니다..
아직 이쪽 분야에 재대로 된 지식이 없어 질문 내용이 초보적일지라도 답변을 기대합니다.
도와주세요 잘 모르겠어요 ..

cell counting시 다른 방법이나 도움이 될 만한 무엇이 있을까요..
#3T3
 
#3T3 L1
 
#cell counting
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리이녀기  |  2015.06.02   
1ml일때 cell counting수가 얼마만큼인지는 모르겠지만, 100배희석하는 것은 1ml일때 cell 수가 아무리 많아서 희석한다고 하더라도 너무 희석배수가 높아서 부정확할 수 있습니다. 좀 힘드시더라도 원래 1ml 에서 cell counting을 해보고 희석배수를 점점 높여서 ( 3~5배로 희석해서 counting해보고 ) 유의적인 희석배수를 사용함이 좋을 것 같습니다.
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