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Ni-NTA agarose |
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답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의) |
protein을 정제하기에 앞서 몇가지 궁금한 것이 있어서 글을 올립니다.
정제 전 Ni-NTA agarose를 column에 충진 시켜야 하는데
어느정도의 양을 넣어야 하는지 잘 모르겠습니다.
정해져 있는 양을 넣어야 하는가요?
정해져 있는 양을 넣어야 하는거면 그것은 column size에 따라 다른건가요?
또 하나의 질문은 column에 충진 된 기존에 사용했던 resin, 즉 Ni-NTA agarose를 제거하고 싶습니다.
어떻게 제거하는 것이 좋을까요?
선배님들의 답변을 기다리겠습니다^-^ |
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qiagen의 QIAexpressionist라는 핸드북이 있습니다. PDF파일도 인터넷 뒤지면 금방찾으실수 있을것입니다. 자세하게 나와있으니 참고 하시고 혹시라고 모르시겠으면 답글달아 주세요..제가 찾아보고 알려드릴께요.. |
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Ni-NTA agarose resin의 용량이 정해져 있습니다.
가령 40kDa protein 10mg/ml resin 이런식으로....
원하는 단백질의 양을 붙일 수 잇는 양을 계산해서 resin을 충진하시는게 좋습니다.
column에 레진이 말라있다면 물을 넣어서 잘 뿔린다음 마이크로 파이펫으로 따내시면 됩니다.
보통은 레진을 제거하기 보다는 wash buffer로 씻고 NiCl 용액을 처리해서 다시 사용하지요.
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