안녕하세요. 현재 MS(methyl specific)-PCR을 시작해보려고 하는 학생입니다. 다름이아니라, bisulfite처리후, PCR진행시 BAND가 뜨지않습니다. PCR Primer는 이미 보고된 primer를 그대로 사용하여 진행하고있습니다. (M-primer, U-primer)모두입니다. 그래서 pcr과정상에 문제는 있는거같지않고 .. bisulfite처리과정중에 문제가있는것 같아, 제 실험과정중에 문제되는것이 있나해서 글을올립니다. 현재 저는 sigma에서 판매중인 kit를 사용하고있습니다. 첨부한 파일은 kit에 대한 설명과 protocol이 나와있는 파일입니다. 제가 실험실 세팅을 하는 입장이어서 .. 편하게 물어볼 사람이없습니다.. 실험과정은 90%에탄올과 에탄올을 첨가한 cleaning solution, balance/ethanol wash solution 이 3가지 시약을 미리준비합니다. 그후에 과정은 적힌그대로 진행을 하고있습니다. (혹시 사용해보신 선후배분들중에 노하우나 꼭 숙지해야할것이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다.) DNA농도는 10ng/ul를 사용하였습니다. 즉, procedure에서 10ul를 원하기때문에 total 100ng으로 실험을 진행했습니다. 그리고는 별 특이한 과정없이 쭉 진행을 해서 PCR를 진행하게됩니다. 지금 다른 LAB의 포닥분꼐서 DNA농도를 400ng정도로 해서 진행해보라고 하셔서, 진행중입니다. 혹시 이 kit를 사용해서 해보신분중에, 아니면 kit modification시 주의하거나, 꼭 처리하고 넘어가야할 부분이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다.