실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
HPLC baseline 관련하여 질문 드립니다.
HPLC (비회원)
안녕하세요, 답답한 마음에 질문 드립니다..
현재 문제는, A 버퍼 단독, B버퍼 단독으로만 흘릴 때는 베이스라인이 평행하게 유지되는데,
gradient를 주어 일정 B버퍼 농도 구간에서 peak가 언덕같은 모양으로 올라온는 것입니다..
또 A 버퍼 100% 흘려주다가 B버퍼를 10%, 20%, 30%로 올려보니 peak가 튀었는데, 40%이상
에서는 또 peak가 안정합니다.
현재 할수있는 방법은 다 해보았는데 계속 같은 현상이에요 ㅠㅠ
항상 해오던 method와 버퍼 조성이고,
A buffer: 99.9% DW, 0.1% TFA
B buffer: 90% ACN, 9.9%DW, 0.1% TFA 입니다..
column washing도 많이 해보고, column도 새로 사보고, 버퍼도 새로 제조해보고, A buffer pH도
바꿔보고, loop도 바꿔보고... HPLC는 산지 얼마 되지 않았어요..
해볼수 있는건 다 해봤습니다ㅠㅠ 도와주세요ㅠㅠㅠㅠ
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