실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Sequencing
PCR 시퀀싱 의뢰전 DNA준비하는 과정질문입니다ㅜㅜ
미니미님 (비회원)
제가 처음연구실에서 일을하고 혼자서 하게 되어 이렇게 질문을 올립니다ㅜ
geneall protocol을 사용하고 있는데 시퀀싱 의뢰 전 샘플을 준비하는 과정을 정리해 보았는데 혹시 같은 회사를 이용하고 계신분 ㅜㅜ도와주세요
1.DNA를 가져오고 (pcr tube or 프리믹스), GeneAll 박스를 준비한다.
2.EP tube에 pcr product(DNA)는 최소 10마이크로를 따고 Buffer PB를 50마이크로 따서 넣는다.(5배)
3.피펫팅하여 섞은 다음 geneall작은 박스안에 있는 SV column 겉에 옮겨 넣는다.
4.centrifuge에 30초간 돌린 후 겉에 튜브에 나온 것을 따서 필터있는 튜브에 넣는다.
5.Buffer NW를 700마이크로를 넣고 30초간 돌린 후 겉 튜브에 나온 건 버린다.
6.1분간 더 돌린다.
7.기존에 겉 튜브는 버리고 1.5ml EP tube를 뚜껑을 자른 후 사용한다.
8.Buffer EB를 50마이크로 넣고 1분간 놔둔다.
9.1분 뒤 centrifuge에 1분간 돌린 후 1.5ml에다 겉에 튜브에 나온 것을 모두 딴다.
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