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supia
(비회원)
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15.02.10 21:12
sgRNA에 원하는 유전자의 20 bp정도의 sequence를 이어서 cas9 과 sgRNA complex가 디자인한 위치를 인식하여 자르게 됩니다. 이후에 세포는 HR 또는 NHEJ 를 이용하여 잘린 부위의 dna를 교정하는데 이 과정에서 몇개의 bp가 deletion 또는 insertion이 됩니다. 이러한 sequence의 변화 3N이 아닌 bp의 변화는 유전자의 translation에서 frameshift가 일어나지 않아서 정상적인 단백질이 생성되지 않습니다. 보통은 early exon을 target하는 것으로 알고 있습니다.
유전자 삽입은 Donor 를 함께 넣어 삽입하게 되는데 잘리고 난 뒤 HR에 의해 DONOR가 잘린 부분의 유전자를 Replacement하게 되어 삽입되어 집니다.
knockout확인은 T7E1 assay 또는 FACS analysis로 하는 것으로 알고 있습니다.
한국에 서울대 김진수 교수님께서 이 system에 대한 특허를 가지고 있다고 알고 있고 툴젠이라는 생명공학 벤처 회사에서 서비스 하고 있습니다. 저도 이전에 세미나 듣고 찾았는데 요즘은 많이 쓰고 있고 논문도 많이 나오고 있는 분야인 것 같습니다. 구글 에서 툴젠 검색하시면 연락처 있고 정보도 얻으실 수 있을 것 같습니다.