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 전체 > Molecular Biology-DNA > Sequencing
조회 2598  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 M13 phage display DNA질문입니다
뒷다리규니규니  |  2015.01.20 18:49
NEB에서 phage library kit 를 구매해서 M13 phage display 진행했는데요
NEB에서 제공하는 메뉴얼 대로 DNA Purification을 하였습니다
그런데 이렇게 나온 DNA가 single strand 라고 하는데요
이 DNA가 원형인가요 아니면 linear 형태인가요?
sequendcing을 다른 회사에 의뢰하려니까 
PCR을 해서 보내하는데...
single strand 면 PCR이 불가능한 것 아닌가요? 프라이머가 한방향 밖에 제작되서....?
아니면 NEB에서 -28 g3, -96 g3 sequencing primer를 제공해서 최대한 이것을 이용하고 싶은데....어떻게 하는 것이 좋을까요?

#M13 phage display
 
#phage DNA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
M13 phage genome은 single strand circular DNA입니다.
M13 phage genome을 double strand DNA로 뽑으려면 phage particle이 아닌 host cell에서 뽑으면 됩니다.

PCR은 DNA 가 single이건 double strand이건 가리지 않습니다.
대왕개구리엘피스  |  2015.01.21   
감사합니다!! 
그럼 한가지 더 질문 드려도 될까요?
그럼 저는 phage particle에서 DNA를 뽑았는데
이걸 PCR진행 후  sequencing의뢰를 하려고 하는데 Primer를 한 쪽방향만 사용해도 되는건가요?
NEB에서는 이 경우 한 쪽방향 primer(-96 g3 sequencing primer)만 사용해도 가능하다고 하는데
정말로 가능한지 궁금합니다.ㅠ ㅠ

뒷다리규니규니  |  2015.01.22   

PCR의 기법중에서 (기법이라고 부를 만한 것도 아니지만).
asymmetric PCR이라는 것이 있습니다. Primer 하나만 넣고 한 strand만 합성하는 것인데, 이 경우에는 PCR 증폭이 log스케일이 아니고 linear scale입니다.

일반적인 PCR에서 다량의 DNA를 얻고자 하는 경우에는 한 primer만 가지고는 목적을 달성할 수 없습니다.

만약 rolling circle amplification을 이용한다면 primer하나로도 충분하지만 역시 증포되는 률은 linear입니다.

대왕개구리엘피스  |  2015.01.22   
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