안녕하세요~ 혹시 이런경험이 있으신분 꼭 도와주세요~ tissue에서 western으로 cleaved casapse3를 잡으려고 했습니다. 참 안잡히다가 band가 나오긴하는데.. 이상한게 있어서 질문합니다~ western 별로 안해봐서 모르는게 많네요.. ab는 cell signaling 9661을 썼습니다.
1. protocol엔 17,19 kDa가 나온다는데 제가 15%gel로 내렸을때는 two band가 나오긴하는데 marker와 비교해보면 19, 23?정도로 더 큰 band가 두개 나옵니다. 원래 이정도는 gel percentage같은거에 의해 달라질 수 있나요?
2. 제가 한실험이 똑같은 injury를 주고 한 그룹은 PBS, 한그룹은 약물을 처리했습니다. 근데 injury + PBS group은 two band가 나오고 injury + 약물 group은 위에 말씀드린 23? 정도의 band만 나옵니다. 제가 알기론 proform이 잘려서 이 두놈이 나오는걸로 알고 있는데 그룹간에 특정 cleaved form이 나오고 안나오는 경우는 어떤경우에 그럴수 있나요? cell signaling 참고 그림에서는 staurosporin을 치면 1band만 나오고 cytochormc를 처리하면 2band가 나오던데 이런거랑 비슷한건가요?
3. 마지막으로 저 두 band를 가지고 정량을하려면 두 band의 intensity값을 합쳐서 보통 계산하나요?