[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
2019 Bio Top5 인터뷰
스폰서배너광고 안내  배너1
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 2745  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Western blot 실험 후 background가 검정색으로 나옵니다~
western  |  2015.01.02 09:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
첨부파일 파일첨부: Western.jpg (60 KB)
이미지 첨부파일
Western blot을 처음 실험하는 학생입니다.

실험 후 detection은 암실에서 진행하고 있는데요. detection하면 membrane 부분이 검정색으로 나옵니다.

밴드는 검출되지 않지만 1차 항체 농도를 바꿔봐야 할 것 같아요~

왜 배경이 검정색으로 나오느지를 모르겠습니다ㅠ

blocking solution은 5%skimmed milk(TBST)로 상온에서 30분 반응시킵니다.

그리고 항체는 TBST로 희석하는데요. 혹시 blocking solution으로 희석해야 하나요~

답변 부탁드립니다.
#western blot
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리미완의꿈  |  2015.01.02   

1차 2차항체 모두 blocking solution 에 넣으시구요
blocking time도 늘려보세요.

그다음에 antibody dilution 비율도 높여보시구요

western  |  2015.01.02    

넵, 감사합니다

1차 항체는 1 :10000배로 희석해서 사용하였고, 2차 항체는 1 : 1000배로 희석한 후 사용하였습

니다~ 그리고 항체 반응시킬때 27도씨에서 교반배양기를 사용하여 반응 시켰는데요~

4도씨에서 반응시켜야 하나요??

H  |  2015.01.02    
1차 2차 항체 희석비율이 바뀐거 같은데요
그 비율이면 보통 1차를 1:1000, 2차를 1:10000으로 하죠~
그리고 1차붙일때 오버나잇으로 할꺼면 4도씨에서 천천히 붙이시고
당일에 바로 2차까지 보실려면 RT에서 붙이세요~
워싱과정은 교반속도도 높여서 깔끔히 워싱되도록 하시고..
blocking만 잘 되면 1차 2차는 그냥 TBS-T에 하셔도 괜찮습니다.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Synthego CRISPR-Cas9, sgRNA을 경제적으로 구매하는 방법 (1.21까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
Eppendorf New 25mL Conical Tubes : 혁신적인 디자인과 다양하고 편리한 사용 (4.1까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
3/6  좌우
771,200733,000
64,00061,000
50,00048,000
406,000386,000
84,20080,000
75,40072,000
98,90094,000
242,400230,000
134,700128,000
37,60036,000
122,800117,000
51,50049,000
34,10032,000
671,700638,000
217,600207,000
264,400251,000
81,30077,000
136,000129,000
86,20082,000
51,40049,000
120,900115,000
98,10093,000
121,800116,000
178,700170,000
최근등록   더보기 >
Cobalt resin을 이용한 단백질 정제를 위해 버퍼를 제조하려고 합니다   01.21
0.2M PB만드는법 좀 알려주세요   01.20
최종농도에 관한 질문입니다. 도움주시면 감사하겠습니다.   01.20
western sample 처리 질문입니다.   01.20
urine 을 이용한 가수분해 실험 질문입니다.!   01.20
crispr cas9 plasmid 관련 문의   01.20
부유세포 Confocal imaging protocol   01.20
Elastase 실험 중 농도 계산 도와주세요 ㅠ_ㅠ   01.20
primer를 통해 DNA크기확인방법   01.20
Media에 들어가는 성분 차이..   01.20
데일리파트너스
투표진행
Q. 제가 이제 막 실험을 시작해서 잘 몰라서 질문합니다ㅜㅜ cell culture하는데 1:2로 계대배양 해두라고 하는데 그러면 하나의 cell dish를 1:2로 계대배양하면 총 3개가 되나요? 2개로 해야하나요?
참여하기
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
라이카코리아