[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
웹진 Vol.22, No.8 (2020년 8월) 발간
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 3544  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Western blot 실험 후 background가 검정색으로 나옵니다~
western  | 2015.01.02 09:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
첨부파일 파일첨부: Western.jpg (60 KB)
이미지 첨부파일
Western blot을 처음 실험하는 학생입니다.

실험 후 detection은 암실에서 진행하고 있는데요. detection하면 membrane 부분이 검정색으로 나옵니다.

밴드는 검출되지 않지만 1차 항체 농도를 바꿔봐야 할 것 같아요~

왜 배경이 검정색으로 나오느지를 모르겠습니다ㅠ

blocking solution은 5%skimmed milk(TBST)로 상온에서 30분 반응시킵니다.

그리고 항체는 TBST로 희석하는데요. 혹시 blocking solution으로 희석해야 하나요~

답변 부탁드립니다.
#western blot
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리미완의꿈  |  2015.01.02   

1차 2차항체 모두 blocking solution 에 넣으시구요
blocking time도 늘려보세요.

그다음에 antibody dilution 비율도 높여보시구요

western  |  2015.01.02    

넵, 감사합니다

1차 항체는 1 :10000배로 희석해서 사용하였고, 2차 항체는 1 : 1000배로 희석한 후 사용하였습

니다~ 그리고 항체 반응시킬때 27도씨에서 교반배양기를 사용하여 반응 시켰는데요~

4도씨에서 반응시켜야 하나요??

H  |  2015.01.02    
1차 2차 항체 희석비율이 바뀐거 같은데요
그 비율이면 보통 1차를 1:1000, 2차를 1:10000으로 하죠~
그리고 1차붙일때 오버나잇으로 할꺼면 4도씨에서 천천히 붙이시고
당일에 바로 2차까지 보실려면 RT에서 붙이세요~
워싱과정은 교반속도도 높여서 깔끔히 워싱되도록 하시고..
blocking만 잘 되면 1차 2차는 그냥 TBS-T에 하셔도 괜찮습니다.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
바이오디 바이오디
Wet 방식의 장점에 속도와 편리함까지 지닌 eBlot & eStain 파격 할인 (8.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
TECAN 한국대리점 20주년 기념 할인 행사 (12.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
nanoString 체험단 / Denovix 할인 행사! / LAMP 2X Master Mix with UD.. (8.27까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Thermo Shaker, Sonicator, Mixer, Heating Block, Rotato.. (8.16까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Reading과 형광 Imaging을 하나의 장비로 한 번에!! [Multi-mode micr.. (8.31까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
4/6  좌우
79,50075,600
468,000
493,000
773,000734,400
482,000
49,000
130,500124,000
93,20088,600
6,000
339,400322,500
47,20044,900
136,000129,200
92,30087,700
17,000
370,000
143,800136,700
139,000132,100
482,000
739,000702,100
109,000
23,000
52,60050,000
125,500119,300
66,50063,200
최근등록   더보기 >
항균필름 실효성 실험   08.12
e.coli중 DH5α균주를 lb액체배지나 lb agar에 계속 보존할수 있나요??   08.12
배축 갈변이 심해요   08.11
Promoter sequence 확인하려합니다 ㅠㅠ   08.11
다음과 같은 것들은 Primer가 없는 건가요??   08.11
동결건조   08.11
enzyme cut   08.11
thioflavin s 실험 정량   08.11
flask를 collagen coating할때   08.11
조직 centrifuge 문의!   08.11
과학기술정보통신부
실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크