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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 RNA추출 시 층분리 문제
RNA층분리  |  2014.11.22 17:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
mouse adipose tissue에서 Trizol을 사용하여 RNA추출하였습니다.
조직 lysis 후 , Trizol에 chloroform을 넣어 vortexing하여 섞은 후,
실온에서 몇분간 방치 하고 12000rpm, 4도씨에서 15분간 centrifuge하였습니다.
정상대로 라면 아래층에 분홍색 가운데 흰색 그리고 제일 윗부분에 투명한 층이 생겨야 하는데
원심분리 후 위에서부터 투명한 층, 하얀 막, 분홍색의 층, 그리고 아래에 또 투명한 층이 크게 생겼습니다.
순도와 농도를 찍을 때 보니, RNA가 제대로 추출이 안되었습니다. 
(260nm, 280nm에서 OD값을 측정하였을 때, 마이너스 값이 나옵니다.)
원심분리 단계까지에서 잘못 된 점이 있었던것 같은데, 어떤 단계에서 잘못되었을까요?
#RNA추출
 
#층분리
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이톢이버  |  2014.11.25   

지방조직의 RNA를 뽑을 경우에
저도 처음에 그런 경우 많이 겪었습니다.. 층이 제멋대로고 역으로 나온경우도 있고..
원인을 모르다가 최근에 알게된게
처음에 Trizol에 담그고 나서
얼음이나 상온에 5~10분정도 가만히 놔두게 되면
위에 지방들이 둥둥 뜹니다
이게 제거가 안되어서 chloroform을 넣고 센트리를 돌리면 지방층때문에 제대로
원심분리가 안됩니다.
팁으로 위에애들만 제거할수도있지만 밑에 층이 따라올라오기때문에 완전히 제거하기는 힘들고
그렇게 지방이 뜨면 팁을 바닥까지 넣고 트라이졸부분만 따서 새 튜브에 옮긴후
chloroform을 넣고 다음스텝 그대로 진행하시면 됩니다.

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