자 에다가 위에 그림인 핫팩처럼 생긴 'Anaerogen' 2.5L 짜리 하나 뜯어서
핫팩처럼 손으로 흔들어주세요
그러면 따뜻해질거예요
따뜻해지면 배지가 든 '자'에(오른쪽그림) 넣고 뚜껑닫고
35~37도 인큐베이터에 24시간 (+,-2) 배양하면 됩니다.
아래는 보충설명입니다.
ANAEROGEN 2.5L용
설명
AnaeroGen은 밀봉된 용기 안의 대기 중에서 산소는 이산화탄소의 자발적인 발생으로 빠르게 흡수된다. 이와 같은 방법은 일반적으로 사용되는 방식과 달리 반응 과정에서 수소의 발생이 없고 그래서 촉매제도 필요하지 않다. 게다가 반응을 활성화시키는데 필요한 물의 첨가도 없다.
설명서에 따라 사용할 때 AnaeroGen은 용기 안의 산소 수준을 30분 이내에 1% 아래로 감소시킬 것이다. 결과적으로 이산화탄소 수준은 9-13%사이가 될 것이다.
AnaeroGen은 분변 오염의 지표로써 비피도 세균의 적합성을 조사하는 중에, 육류와 육류 제품에 있는 이들 세균을 감별하기 위한 방법에 사용되었다.
사용방법
1. 적당한 혐기성 배양 용기에 접종된 배지 플레이트를 위치시킨다. 일회용 플라스틱 페트리 접시는 플레이트의 내부와 외부사이에 가스 이동에 도움이 될 수 있게 통기되는 종류이어야 한다.
2. 표시된 절취선을 따라 AnaeroGen주머니를 찢어 개봉하고 안에서 주머니를 꺼낸다.
3. 즉시 용기 안에 있는 플레이트 케리어에 있는 적당한 클립에 AnaeroGen 주머니를 위치시킨다.
주의. AnaeroGen 주머니는 공기 중에 노출되면 따뜻하게 될 것이다.
4. 즉시 용기 뚜껑을 닫는다.
주의. 호일 주머니를 개봉하고 용기 뚜껑을 닫는데 걸린 시간이 1분을 초과해서는 안 된다.
지나친 노출은 활성의 감소를 가져올 것이고 용기 안에 완전한 혐기성 조건을 이룰 수 없을 수도 있다.
5. 적당한 배양기간 후에 플레이트를 빼고 혐기성 균의 존재를 관찰한다. 만일 플레이트의 재배양이 필요하면 새 AnaeroGen 주머니를 위에서 설명한 2-5단계를 다시 사용해야 한다.
6. 배양 후, 고갈된 AnaeroGen 주머니는 적절한 실험실 쓰레기와 버려야 한다.
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레벨1
leah lee
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14.11.11 13:09
프리드만님 감사합니다.
Anaerobic Jar에서 Anaerobic 팩을 넣었다는 것이 빠져있네요.ㅠㅠ
말씀해주신 언에어로빅팩과 인디케이터를 함께 넣어서 배양합니다.
그런데
말씀 해 주신 부분중에, 사용 설명서 1번에.
1. 적당한 혐기성 배양 용기에 접종된 배지 플레이트를 위치시킨다. 일회용 플라스틱 페트리 접시는 플레이트의 내부와 외부사이에 가스 이동에 도움이 될 수 있게 통기되는 종류이어야 한다.
이 부분이 있는데-
플레이트 내부와 외부 사이에 가스 이동이 안되서,
플레이트 내부의 원래 있던 산소를 밀어내고 팩에서 생성된 혐기환경이
플레이트 내부로 들어가지 않더라구요.
그래서 언에어로빅 팩으로 혐기 환경을 조성해도,
플레이트뚜껑안쪽으로 공기가 유입이 안되
플레이트 내부가 완전한 혐기 환경이 조성이 안된다는 요것이 지금 문제입니다.
어떻게 해결 해야 할까요?
만약 그래도 안되면..
클로스트리디움을 어디로부터 고체배지에 접종하신건지 궁금하네요..
왜냐하면 고체배지에 접종하기 전 단계에서 문제가 있을 수 도 있을꺼같아서요
제가 답변드리는 아래와 같은 방법대로 해보세요
우선 접종하고자 하는 클로스트리디움 속을
쿠키드미트 배지에 협기조건으로 증균배양한 다음 배지가 위로 떠오르는 것을 확인하고
(만약 쿠키드밋 배지가 떠오르지 않았다면 증균배양이 되지 않아 그 전 단계에서 잘못된것임)
TSC나 영양고체 평판배지에 접종하여 협기조건으로 배양해보세요
제가 수많은 Clostridium perfringens, C.botulinum 을 다뤄봤는데요
보통 '자'가 아니더라도 락앤락통에 넣고 Anaerogen 넣어도 균이 잘자라거든요..
*주의 '자'의 용량(리터) 이상의 Anaerogen 넣기.
예) 5리터짜리 '자' 나 '락앤락통' = 2.5 Anaerogen 2개
또 한가지 AnaeroGen 종류가 두가지인가 세가지가 있어요..
클로스트리디움에 맞는 AnaeroGen을 선택하셨는지 확인 부탁드릴께요
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레벨1
leah lee
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14.11.11 17:13
프리드만님 감사합니다.
제가 사용 한 균주는, Clostridium sporogenes ATCC 11437 균주로,
정량화 되어있는 균주를 사용했어요.
언에어로젠 팩은, Oxoid사의 AnaeroGen (2.5L)를 사용하였습니다.
FTM에서 혐기적 조건에서 배양되는 것도 확인했어요.- 균의 활성화 미리 확인
인디케이터로 혐기 조건이 되는 것을 확인하였는데.
A브랜드의 TSA,B브랜드의 TSA,C브랜드의 TSA배지에 접종 후,
같은 자에 언에어로젠을 넣어 키웠습니다.
그런데 한 브랜드의 TSA에서만 클로스트로디움이 자라지 않았어요.
예를들어 C브랜드요.
문제를 파악하기 위해 같은 조건으로 언에어로빅자에 언에어로젠을 넣어
그 브랜드의 TSA의 클로스트로디움균/ 다른 호기성균주를 접종 배양 했을때,
클로스트로디움균이 자라지 않고 호기성 균주가 자랐습니다.
C브랜드의 배지의 경우 배지 내 외부로 공기가 잘 통하지 않는 문제점을 파악했습니다.
배지 플레이트를 뚜껑만 잡고 살짝 아래부분을 당겼을때
바로 열리지 않고 약간의 힘을 가해야 열려요.
플레이트 내외부의 공기가 안통해, 자에 넣어도 내부에 산소가 남아있는거죠. ㅠㅠ
뚜껑을 바꿀 수도 없고, 뚜껑을 조금 띄워야 공기가 통할텐데.
일단 그 브랜드의 배지에 접종하면 내외부에 공기가 안통해서
자에 넣어도 내부가 완전 혐기성이 안된다는 것이 문제입니다.
팩을 두개 터뜨리면 내외부 공기가 통할까요?,,
플레이트 뚜껑이 문제군요..
음.. 압이 걸려있다면 2개 넣어도 소용없을꺼같아요..
대체 방안이...
1. 플레이트 뚜껑에 불로 달군 주사기바늘로 미세하게 구멍을 내주는 건 어떨까요?
2. 공 플레이트 뚜껑(SPL사 외)으로 교체해서 사용하시는건 어떨까요?