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질문 oocyte에서 cAMP를 측정하였습니다만 문제가... (엘피스님 도와주세요)
알바보라  | 2014.10.23 00:21
 난자내 cAMP를 측정하기 위해 GE Healthcare사의 제품인 Amersham cAMP biotrak Enzymeimmunoassay (EIA) kit를 이용하였습니다. (non-acetylation)
protocol에 방식대로 측정하고자 하였으나 난자가 깨지지 않는 문제점과 standard curve가 뒤죽박죽으로 나왔습니다. 이에 브릭에 찾아보니 엘피스님이 2008?년 정도에 난자 내 cAMP를 측정하셨다는 글을 보고 질문을 드립니다.

질문 1 . 난자를 이용하여 kit의 lysis solution에 넣었을 때 깨지지 않는 문제가 생기는데 어떻게 하시는지 ?
저는 sonicator를 이용하여 인위적으로 깨트렸습니다.

질문 2. 보통 난자를 몇개씩 sampling 하시나요 ?
 저는  100개씩 sampling을 하였습니다

질문 3. 다른 kit를 사용하시면 어디회사 제품을 이용하시는지 ?

질문 4. 주의해야할 부분이 있을까요 ?

질문 5. cAMP를 측정해주는 회사가 있는지 ?
#cAMP
 
#oocyte
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2014.10.23   
25년전 했던 실험이고, 항체를 구매해 직접 RIA를 세팅해서 실험했기 때문에 키트를 사용해 본 적은 한번도 없습니다.

난자가 깨지지 않는 것은 어떻게 확인했나요?
당시에는 freezing & thawing 3회 정도만 해주고 assay를 했습니다. 보통 한번 실험에 100-200개 정도를 사용했습니다. 당시는 sonicator도 없던 시절이었습니다.

하지만 그것보다는 standard curve도 잡히지 않는 것이 시급한 문제로 보입니다.
실험세팅의 문제인지 또는 시약 또는 시약의 감도 문제인지는 모르겠지만 standard curve가 그려지지 않는 상태에서 sample의 상태를 논의한다는 것이 무의미해 보입니다. 

Standard를 제대로 잡는 것 부터  다시 고민해야 할 듯 합니다.
알바보라  |  2014.10.28   

저는 sonicator를 사용한 뒤 현미경을 이용하여 깨짐정도를 판별하였습니다.

standard curve의 문제점을 찾아야하는데 kit값이 비싸서 도전하기가 상당히 어렵습니다.

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