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제 생각에는 ATG를 제거했어야 할 것 같은데요.
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Clone의 역습
(비회원)
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14.10.06 14:04
가능한 경우는 아래와 같지 않을까합니다.
1. promoter의 basal expression level 굉장히 낮은 경우일 수 있습니다. --> 해당 promoter의 transcription factor를 같이 발현시켜보면 알 수 있을 듯 합니다.
2. target gene cds에 있는 ATG가 문제일 수 있을 것 같습니다.
--> target gene ATG와 luciferase의 frame이 같은지 확인해보세요. frame이 같다면 luciferase가 frame shift때문에 잘못 생겨날 가능성은 어느정도 배제 할 수 있을 듯 합니다. 물론 target gene cds가 어느정도나 들어가 있어서 luciferase activity에 영향을 줄 정도인지는 확인을 해봐야겠지만요.
--> frame이 안 맞다면 cds부분이 제외되게끔 cloning primer를 새로 짜셔도 되고, 아니면 frame이 맞도록 fix를 하셔도 될 듯합니다. fix하는 건 PCR based mutagenesis로 하시면 될 것 같습니다.