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본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
Factor Xa의 manual을 보시면 unit표기가 되어 있을 겁니다.
protein의 전체량을 구하신 후 해당 unit만큼을 넣어 주시면 됩니다.
Volume은 경우에 따라 달라지는 내용이기 때문에 어떤 volume이 가장 좋다라고 말씀드릴수는 없지만 가능한 단백질이 농축되어 있는 상태에서 적은 volume으로 하시는 것이 좋습니다 (이는 모든 enzyme반응에 공통적인 내용입니다). 온도는 가능한 4C를 유지하는 것이 좋고 incubation time은 manual에 있는 표를 참조하시되 일정한 시간 간격으로 샘플링을 하여 자신만의 control을 가지고 있어야 합니다. 물론 function과 관련없는 protein인 경우엔 37C에서 enzyme반응을 해주는 것이 가장 좋습니다.
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초짜!!!
(비회원)
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07.10.02 10:27
단백질 농도를 대략 0.5~1 mg/ml로 맞추어준 해당 unit의 2배 정도의 FXa를 사용해서 4C에서 overnight 반응시켜서 cleavage했었습니다.
경험적으로 단백질양에 상응하는 unit만큼의 FXa처리를 했을때는 10-20% 정도는 cleavage되지 않더군요.
한번하고 끝나는 실험이 아니라면 e-tube에 sample을 소량씩 분주한 후, cleavage 조건을 조금씩 변경 (protein농도와 FXa의 사용량 등)시키는 방법으로 cleavage조건을 찾고 실험하시는게 좋습니다.